应用自体富血小板凝胶治疗深Ⅱ度烧伤创面的实验研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:haliluluya
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目的利用新西兰兔深Ⅱ度烧伤模型,评价自体富血小板凝胶的疗效,通过研究β1整合素、基因物质p63的变化,探讨富血小板凝胶对新西兰白兔烧伤创面愈合的影响,及其对表皮干细胞分化、增殖的促进作用。方法将45只新西兰大白兔,雌雄不限,体重2.5~3.0 kg,随机分为A、B、C三组,每组15只,用电子恒温电烫仪在大白兔背部对称两侧建立深Ⅱ度烧伤模型。A组为实验组用富血小板凝胶覆盖伤口,B组为对照组用贫血小板凝胶覆盖伤口,C组为空白组用生理盐水覆盖伤口,隔日常规清创换药。每组于伤后第1、3、7、14、21天随机断颈处死3只白兔,切取背部两侧创面,组织固定、包埋、制作病理切片。以β1整合素和基因物质p63作为表皮干细胞的鉴别标志物,用免疫组织化学法检测β1整合素和基因物质p63在创面皮肤组织中的分布情况。在光学显微镜下观察切片,每张切片在皮肤层随机选取个10不连续的视野,用Axio Vision显微图像采集系统拍摄图片,应用Image-Pro Plus 5.0图像分析软件计算每个视野阳性表达的积分光密度值(integral optical density, IOD)结果1.肉眼观察新西兰大白兔动物烧伤模型可见烧伤创面表皮坏死。病理切片证实创面深达真皮深层,为深Ⅱ度烧伤模型,达到进一步实验要求。2.免疫组化检测病理切片分为β1整合素、基因物质p63两个指标。实验发现,两个指标的阳性细胞IOD在富血小板凝胶组、贫血小板凝胶组和生理盐水组中具有一定的规律。三组在术后1天阳性细胞IOD均较低,富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组在术后7天阳性细胞IOD达到峰值,然后又逐渐降低,生理盐水对照组在术后14天阳性细胞IOD达到峰值,然后又逐渐降低。富血小板凝胶组峰值高于生理盐水对照组和贫血小板凝胶组的峰值。2.1β1整合素:在术后1天,富血小板凝胶组、贫血小板凝胶组、生理盐水对照组阳性细胞IOD分别为1076.24±99.85、1074.60±125.44、1074.60±99.703,三组间阳性细胞IOD无明显差异(P>0.05);术后第3天各组阳性细胞IOD分别为2045.38±122.70、1858.34±41.94、1614.85±131.44,富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD高于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.01),富血小板凝胶组高于贫血小板凝胶组阳性细胞IOD,差异有统计学意义(P<0.01);术后第7天各组阳性细胞IOD分别为3034.10±63.58、2779.70±99.14、1839.37±55.614,富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD高于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.01),富血小板凝胶组高于贫血小板凝胶组阳性细胞IOD,差异有统计学意义(P<0.01);术后第14天各组阳性细胞IOD分别为1643.97±49.11、004.47±97.15、2421.29±201.54;术后第21天各组阳性细胞IOD分别为805.66±16.52、1182.94±106.88、1169.75±310.21。术后14天和21天富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD低于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.01),富血小板凝胶组阳性细胞IOD低于贫血小板凝胶组差异有统计学意义(P<0.01)。2.2基因物质p63:在术后1天,富血小板凝胶组、贫血小板凝胶组、生理盐水对照组阳性细胞IOD分别为158.99±24.27、143.86±21.73、145.88±26.65,三组间阳性细胞IOD无明显差异(P>0.05);术后第3天各组阳性细胞IOD分别为351.69±34.74、322.06±22.32、289.30±35.87,富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD高于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.05),富血小板凝胶组高于贫血小板凝胶组阳性细胞IOD,差异有统计学意义(P<0.05)。术后第7天各组阳性细胞IOD分别为967.10±37.35、774.39±56.73、、357.31±34.56,富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD高于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.05),富血小板凝胶组高于贫血小板凝胶组阳性细胞IOD,差异有统计学意义(P<0.05)。术后第14天各组阳性细胞IOD分别为478.08±34.79、407.50±17.49、541.69±29.34,术后14天富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD低于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.01),富血小板凝胶组阳性细胞IOD高于贫血小板凝胶组差异有统计学意义(P<0.01);术后第21天各组阳性细胞IOD分别为155.78±16.41、271.64±20.44、359.50±13.10,富血小板凝胶组和贫血小板凝胶组阳性细胞IOD低于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.01),富血小板凝胶组阳性细胞IOD低于贫血小板凝胶组差异有统计学意义(P<0.01)。2.3β1整合素阳性细胞在主要位于细胞膜,为棕黄色颗粒。基因物质p63素阳性细胞在主要位于细胞核,为棕黄色颗粒。到术后7天A组较其他两组真皮层皮脂腺和毛囊增多,且大量强阳性棕黄色颗粒出现。到术后21天A组较其他两组棕黄色颗粒减少,真皮层汗腺、皮脂腺和毛囊增多,表皮结构层次分明,真皮和表皮形态结构基本正常。结论1.自体富血小板凝胶对表皮干细胞分化、增殖具有正调控作用。2.自体富血小板凝胶可以促进深Ⅱ度皮肤烧伤创面的愈合。
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