论文部分内容阅读
研究目的视网膜缺血与许多眼部疾病的发生发展存在联系,比如视网膜血管阻塞性疾病,新生血管年龄相关性黄斑变性,增生性糖尿病视网膜病和青光眼等,这些眼部疾病对视力存在严重的威胁。白藜芦醇是一种存在于红酒中的多酚化合物,有很强的抗氧化的能力,在脑缺血灌注损伤、小鼠视网膜血管退行性损伤及体外视神经病变中都起到神经保护作用。本次研究将主要验证白藜芦醇是否对大鼠视网膜缺血再灌注损伤有保护作用,并且进一步探讨其保护机制。本论文从两个方面进行研究：1.大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型的建立及白藜芦醇的神经保护作用。2.白藜芦醇对于大鼠视网膜缺血再灌注损伤神经保护作用的机制。研究方法1.大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型的建立及白藜芦醇的神经保护作用在本研究中我们采用的损伤模型是Wistar大鼠高眼压模型,即对大鼠的视网膜采用高压(120mmHg)压迫(造成缺血损伤),持续时间是60分钟,再灌注的时间是1天。应用荧光金染料逆行追踪标记检测视网膜神经节细胞存活的细胞数,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)及蛋白印记法检测Thy-1的表达水平,视网膜电生理检测b波振幅及b波比值的变化,免疫组织化学法检测胆碱乙酰基转移酶及波形蛋白的表达水平。2.白藜芦醇对于大鼠视网膜缺血再灌注损伤神经保护作用的机制。应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)及蛋白印记法检测HO-1(血红素氧化酶-1),MMP-9(基质金属蛋白酶-9)及iNOS(诱导型一氧化氮合酶)的表达水平。研究结果缺血再灌注损伤前给予溶剂会造成视网膜神经节细胞存活数目减少,Thy-1的mRNA/蛋白表达水平下降,视网膜电生理b波振幅及b波比值降低,无长突细胞胞体数目减少及神经纤维胆碱乙酰基转移酶的荧光强度减弱,Muller细胞标志蛋白-波形蛋白的荧光强度增强,以及HO-1, MMP-9及iNOS mRNA/蛋白表达水平升高。在视网膜缺血之前15分钟给予实验大鼠不同剂量的白藜芦醇,可以呈剂量依赖性并且明显地改变上述损伤变化。较缺血再灌注损伤组,白藜芦醇给药组视网膜神经节细胞存活数目增多,Thy-1的mRNA/蛋白表达水平上升,视网膜电生理b波振幅增加、b波比值升高,无长突细胞胞体数增多及神经纤维胆碱乙酰基转移酶的荧光强度增强,Muller细胞标志蛋白-波形蛋白的荧光强度减弱,以及HO-1mRNA/蛋白表达水平更加升高,MMP-9及iNOS mRNA/蛋白表达水平下降。结论我们的研究结果证明,白藜芦醇可能通过升高HO-1,降低MMP-9及iNOS的表达对视网膜缺血再灌注损伤发挥神经保护作用。因此,白藜芦醇可能对视网膜缺血相关性疾病有潜在的治疗价值。