论文部分内容阅读
目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮层中白介素1相关受体激酶1(IRAK1)的表达变化并探讨其相关机制。方法1.在体实验：将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组,根据再灌注时间不同,分为6h、12h、1d、3d、7d组。采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法,建立大鼠全脑缺血再灌注模型,应用Western Blot、免疫组织化学、免疫荧光方法检测各组皮层的IRAK1和Cx43蛋白的表达；在造模前1h予以大鼠腹腔注射Gap26,用Western Blot方法测定IRAK1的表达。2.离体实验：采用二氯化钴诱导C6细胞,建立星形胶质细胞化学性缺氧模型,根据刺激时间不同分为1h、3h、6h、12h、24h组,应用Western Blot方法测定IRAK1和Cx43蛋白的表达；运用siRNA小干扰载体去除培养细胞中的IRAK1,用Western Blot方法测定Cx43蛋白的表达。结果(一)在体实验：(1) IRAK1蛋白在假手术组大鼠大脑皮层中表达较低；与假手术组比较,IRAK1蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤后6h开始升高(P<0.05),3d时达到高峰(P<0.05),7d时表达有所下降(P<0.05)；Cx43蛋白在假手术组大鼠大脑皮层中表达较低；与假手术组比较,Cx43蛋白在大鼠全脑缺血再灌注后6h开始升高(P>0.05),3d时达到高峰(P<0.05),7d时有所回调(P>0.05)；通道蛋白Cx43与IRAK1表达有偶联样改变。(2)通过免疫组织化学法检测IRAK1蛋白在大脑皮层的表达,结果显示,IRAK1蛋白在假手术组中的大脑皮层表达较低；与假手术组比较,IRAK1蛋白在缺血再灌注损伤中表达明显增高,具有显著差异(P<0.05)。(3)通过免疫荧光双标方法检测IRAK1蛋白在脑中的细胞定位,结果显示,在假手术组和缺血再灌注损伤组中,大鼠大脑皮层中GFAP表达(+)的细胞IRAK1表达(+)、在Neun表达(+)的细胞中IRAK1表达(-)、在IBA1表达(+)的细胞IRAK1 (一);与假手术组相比,全脑缺血再灌注损伤后皮层中IRAK1蛋白表达明显增高,具有显著性差异(P<0.05)。(4)使用Gap26干预Cx43蛋白表达后,IRAK1的表达同样下调,与未干预组比较有显著性差异(P<0.05)。(二)离体实验：(1)IRAK1蛋白在正常对照组表达较低,在二氯化钴刺激后,IRAK1蛋白在星形胶质细胞中在刺激后3h开始显著增加(P<0.05),6h达到高峰(P<0.05),12h已降至正常水平；Cx43蛋白的表达在3h开始上调(P<0.05),并在6h到高峰(P<0.05),12h开始下降,具有显著差异。(2)在化学性缺血缺氧模型中,干预IRAK1蛋白表达后,Cx43蛋白的表达也相应下降,与未干预组比较具有统计学差异(P<0.05)。结论1.大鼠全脑缺血再灌注损伤后IRAK1和Cx43蛋白表达均增高,呈现时间依赖性,且两者表达有偶联样改变。2.IRAK1主要定位于星形胶质细胞,而通道蛋白Cx43在星形胶质细胞中表达最多,两者定位相同。3.抑制IRAK1蛋白的表达同时能抑制Cx43蛋白的表达,使用特异性通道阻断剂Gap26抑制Cx43蛋白的表达也能抑制IRAK1蛋白的表达。4.大鼠脑缺血再灌注损伤后IRAK1蛋白表达增高可能与Cx43半通道的病理性开放有关。