腰椎软骨终板细胞凋亡与椎间盘退变的关系研究

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背景和目的:腰褪痛是临床常见病之一,人群中大部分都有腰腿痛的经历。目前多数研究表明腰椎间盘退变(IDD)在腰腿痛中起重要作用。但导致腰椎间盘退变的原因,尤其是与其密切相关的椎体软骨终板退变及细胞凋亡与其之间的关系尚未完全明了。本研究拟通过建立腰椎退变的动物模型,研究腰椎椎体软骨终板细胞凋亡与腰椎间盘退变之间的关系,确定凋亡在其退变过程中的作用,为腰椎间盘退变性疾病的预防和治疗提供新手段。方法:选取健康清洁型大白鼠24只,随机分为手术实验组和手术对照组。手术实验组沿L1-L6棘突做正中切口,剥离椎旁肌,切除L1-L6的棘上、棘间韧带及两侧关节突后外1/2,诱发腰椎加速退变,手术对照组仅切开皮肤后缝合。分别于术后9周、18周、36周对两组动物施行过度麻醉处死,完整取下包含上、下椎体的椎间盘。对腰椎标本行矢状位切片,分离软骨终板和椎间盘。腰椎间盘按Thompson椎间盘退变病理分级标准进行分级评定。将软骨终板石蜡包埋切片,做HE染色和TUNNEL染色。评估软骨终板消失状况,计数腰椎椎体软骨终板细胞凋亡数量。结果:1.腰椎间盘退变的组织学表现HE染色切片,评估腰椎间盘退变程度。9周手术对照组大鼠和9周手术实验组大鼠腰椎间盘结构基本正常。18周手术对照组大鼠腰椎间盘出现轻度退变表现,纤维环前缘软骨组织增生,排列不规则,髓核偏向后方,髓核皱缩,纤维环出现裂隙。椎体边缘光滑。18周手术实验组大鼠腰椎间盘明显退变,纤维环部分纤维化,纤维环和髓核分界不明显,椎体前后缘有骨赘形成。36周手术对照组大鼠腰椎间盘与18周相比退变明显,36周手术实验组大鼠腰椎间盘严重退变,纤维环完全纤维化,髓核消失,椎体前后缘骨赘。2.HE染色观察腰椎软骨终板细胞凋亡状况软骨终板的结构随年龄增长逐渐退变。软骨终板形态变化明显,退变随时间加速。术后9周,手术对照组和手术实验组腰椎软骨终板较厚,可见少量散在分布的软骨陷窝。术后18周,终板结构出现局部消失,可见散在分布的软骨陷窝、凋亡软骨细胞和凋亡小体。术后36周,退变显著,终板消失显著。3.Tunel染色比较手术对照组和手术实验组软骨终板内细胞凋亡率9周实验组和对照组软骨终板内均可见散在凋亡细胞,未见差别。18周实验组和对照组均可见凋亡细胞较9周增多,以实验组增多明显,两者出现差别。36周实验组比对照组凋亡细胞数量显著增多,两者出现明显差别。结论:1.腰椎退变实验模型加速了腰椎间盘退变和终板细胞凋亡数量。2.腰椎软骨终板细胞凋亡是腰椎间盘退行性变的重要原因之一。
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