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背景肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的蛋白8家族样蛋白2(TNF-αinduced protein8like2,TNFAIP8L2,TIPE2)蛋白被认为是一种非常关键的免疫调节蛋白,TIPE2基因与肿瘤的发生、发展关系密切。白血病是一种发病率高,致死率高的恶性肿瘤,可引起骨髓造血干细胞的癌变,产生大量未分化的免疫细胞,这种类型的细胞不能发挥正常的免疫调控功能,因此就会使正常的造血系统受到影响,最终导致白血病的发生。有报道显示,TIPE2基因在淋巴细胞内有高表达的现象,提示TIPE2基因在淋巴细胞的增殖、分化等功能中可能发挥着重要作用。近来有研究认为TIPE2与肿瘤的发病有密切关系,但是其在白血病发生、发展中的作用尚未明了。本课题收集了602例白血病伴有淋巴瘤混合发病病人的组织标本,利用基因操纵技术上调或者下调白血病细胞中TIPE2的表达,并进一步检测了TIPE2基因对白血病细胞的增殖、生长周期、细胞凋亡和迁移的影响,为深入探讨TIPE2在白血病发病中的具体作用机制奠定了基础。目的探讨TIPE2基因对白血病细胞各种生物学功能的影响,以及其影响白血病发生、发展的具体作用机制。方法将TIPE2基因的CDS区全长与pCMV-C-Flag和pEGFP-N2载体重组,构建过表达质粒Flag-TIPE2和GFP-TIPE2,然后将重组质粒经电转仪转到白血病细胞K562中,加G418抗生素进行药物筛选后,得到稳定的亚细胞株K562-FLAG(对照)、K562-FLAG-TIPE2、K562-GFP(对照)和K562-GFP-TIPE2,以及经pSilence4.1-CMV neo干扰沉默后筛选得到稳定亚细胞株K562-Si-C(对照)和K562-SiTIPE2。用RT-PCR和qPCR方法检测TIPE2基因mRNA的表达水平。用MTT染色法进行人工计数,并作出稳定细胞株的生长曲线图,之后再用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。用293T作为蛋白表达系统,用细胞免疫组化方法检测TIPE2表达对细胞凋亡的影响。才用Transwell小室和软琼脂实验来检验对TIPE2基因敲低和过表达的情况下,白血病细胞迁移的变化。最后,用免疫印迹杂交方法检测TIPE2过表达后对JNK1、Caspase3、Caspase8等蛋白表达水平的影响,进一步探讨TIPE2在白血病中的作用。结果用免疫组化方法检测TIPE2的表达,结果显示白血病组织中TIPE2表达阳性率为69.3%(417例)。利用基因操纵技术上调或者下调白血病K562细胞中TIPE2的表达水平,成功构建TIPE2基因过表达重组质粒并把其稳定转染到K562细胞中得到K562-FLAG(对照)、K562-FLAG-TIPE2、K562-GFP(对照)、K562-GFP-TIPE2、K562-Si-C(对照)和K562-SiTIPE2细胞亚克隆。过表达或者敲低白血病细胞中TIPE2后,经流式细胞仪检测发现,TIPE2对白血病细胞的周期没有明显影响(P>0.05);用免疫印迹杂交法和免疫组化检测cleaved-caspase-3,cleaved-caspase-8,caspase-3,caspase-8等凋亡相关蛋白的表达,结果发现,TIPE2能引起白血病细胞的凋亡(P<0.05)。之后,在上调TIPE2后,经细胞迁移实验(Transwell小室检测和软琼脂实验检测)发现K562细胞生长加快(P<0.05),迁移能力升高,而下调TIPE2可以使白血病细胞的生长减缓,迁移力降低(P<0.05)。结论1、TIPE2基因的表达能促进白血病K562细胞的生长和迁移。但TIPE2基因对细胞周期没有明显影响。2、TIPE2基因可能通过p-JNK诱导细胞凋亡。TIPE2过表达后使p-JNK1表达升高,同时发现caspase-8的表达较对照组升高。