盐胁迫条件下非洲哈茨木霉胞外聚合物的组成及功能研究

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胞外聚合物(Extracellular polymeric substances,EPSs)是由微生物分泌并附着在细胞壁表面的多聚糖和蛋白质等复合物,在保持细胞形态、胞外酶的分泌以及胁迫环境下的积极防御等方面起着重要作用。本文旨在探究不同浓度的NaCl胁迫下耐盐性有差异的两株木霉菌的胞外聚合物组成和功能并初步分析了其耐盐机理。主要研究结果如下:1.依据ITS/TEF/RPB序列ACCC 32524和ACCC 32527菌株鉴定为非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum)。不同盐分对ACCC 32524和ACCC 32527生长抑制情况依次为Na3PO4>NaCl>NaNO3>Na2SO4>乳酸钠。以葡萄糖为碳源,二者的EPSs主要成分均为多糖类物质。在高盐(0.6 mol/L NaCl)胁迫5天后,ACCC 32527可分泌大量的EPSs多糖,较对照提高了1.1倍,显著高于ACCC 32524。2.ACCC 32524和ACCC 32527的EPSs中有2种不同分子量的多糖组分(EPSs-1和EPSs-2)。随NaCl浓度增加,多糖分子量增大,EPSs-1相对含量降低,而EPSs-2相对含量提高,且EPSs-1组分中的葡萄糖含量降低,而半乳糖和甘露糖的含量则显著上升。3.通过EPSs与NaCl溶液作用前后的红外光谱图比较发现EPSs对NaCl无吸附作用。NaCl胁迫处理后,ACCC 32524和ACCC 32527 EPSs多糖抗氧化活性呈相反的变化趋势,即随着NaCl胁迫浓度增高,ACCC 32524 EPSs多糖氧自由基和ABTS+·清除能力下降,而ACCC 32527 EPSs多糖的氧自由基和ABTS+·清除能力增强。4.分析了有无NaCl胁迫下ACCC 32524和ACCC 32527的差异转录组和代谢组,共获得44,594条单基因和336个代谢产物。在NaCl(0.4和0.6 mol/L)胁迫下,共有31个糖类转运蛋白、多糖合成酶(糖基转移酶、多糖脱乙酰酶等)等相关基因发生上调表达。此外,筛选出ACCC32524中8个渗透调节,7个抗氧化酶和6个细胞壁及胞外物质(疏水蛋白)合成的相关基因;ACCC 32527中7个渗透调节,13个抗氧化和4个细胞壁及胞外物质(疏水蛋白)合成的相关基因,且在NaCl胁迫下多数为上调表达。与ACCC 32524相比,ACCC 32527在NaCl胁迫下,多糖合成的前体物质葡萄糖-1-磷酸以及真菌渗透调节的关键物质(如甘油、氨基酸及其衍生物等)积累量较高。5.以果糖、木糖、丙三醇、甘露醇或蔗糖为碳源时,ACCC 32524和ACCC 32527的EPSs主要成分为蛋白质,其次为多糖类物质。不同碳源培养下,NaCl胁迫均能促进EPSs中多糖物质的合成,其中以木糖最为明显,含量较对照提高41%以上。以蔗糖为底物时,ACCC 32524和ACCC32527的EPSs多糖获得最大自由基清除能力。不同碳源及NaCl胁迫对ACCC 32524 EPSs多糖组分种类无明显影响,但可改变单糖间比例。本论文以非洲哈茨木霉ACCC 32524和ACCC 32527为研究对象,通过分析有无盐胁迫下的EPSs组成、抗氧活性、转录组和代谢组的差异,初步确定了与EPSs合成相关的关键基因和代谢产物,为揭示真菌的抗盐机制提供了重要数据并初步奠定了理论基础。
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