近年来,大鲵养殖产业得到了快速发展。同时,在大鲵养殖过程中也出现了各种各样的病害问题,这已经严重威胁到了大鲵养殖业的发展。因此,对于养殖过程中大鲵的健康状况的研究可以促进大鲵健康养殖。大鲵体表黏液凝集素(ADL)是大鲵的重要免疫分子之一,它的数量变化可以直接反映出大鲵的健康状况。本论文利用ELISA方法建立了一种快速检测ADL数量的方法,以期为大鲵的健康养殖提供基础数据。具体工作如下:1.以提取纯化后的ADL为完全抗原,经免疫程序免疫新西兰白兔制备抗ADL的抗血清,获得的抗血清效价为51200。用BSA、OVA、MCL-T来检测抗体特异性,结果表明得到的抗血清特异性较好。2.以抗ADL抗体为基础建立间接非竞争ELISA方法,并优化了抗原抗体最佳稀释度、抗体反应时间、显色时间等实验条件。结果表明,多克隆抗体的最适稀释度为1:3000,一抗反应时间为1 h,二抗反应时间为1 h,显色时间为20 min,在31.25~1000 ng/mL的范围内,ADL浓度的对数值和吸光度之间具有较好的线性关系,添加回收率为91.5~109.5%。重复性实验表明,其板内变异系数0.92~9.68%,板间变异系数为1.57~12.35%,达到ELISA测定方法的质量控制要求。3.将优化后的ELISA测定方法进行大鲵样本的测定,分别对大鲵样本头部、躯干部及尾部肌肉组织中的ADL含量进行测定,结果表明ADL在大鲵的头部、躯干及尾部的肌肉组织中均有分布,占肌肉组织含量的0.26%左右,在躯干部的含量相对较高,不同大鲵之间相同部位的ADL含量分布变化范围较小。4.利用4℃、21 d以及37℃、7 d保存实验验证ADL ELISA检测试剂盒的稳定性,结果表明该试剂盒在4℃条件下21 d内稳定。以上这些结果表明,获得的ELISA方法各项参数都达到了检测的需要,具有较高的特异性及重复性,可用于实际样本的检测。