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第一部分、大鼠UCP2基因表达的转录调控研究
解偶联蛋白2(Uncoupling protein2，UCP2)是位于线粒体内膜上的一种载体蛋白，具有介导质子渗漏，减少活性氧生成和ATP合成的功能。UCP2基因广泛表达于许多组织，特别是在白色脂肪组织和免疫相关组织含量尤为丰富。但是正常肝细胞UCP2表达很低甚至不表达，肥胖和内毒素等刺激可诱导大鼠肝细胞表达UCP2，此时UCP2表达的转录调控机制，尚不清楚。
为了探讨大鼠UCP2(rUCP2)基因的转录调控机制，我们利用5-快速扩增cDNA末端(5-RACE)技术和生物信息学分析方法确定rUCP2基因可能的转录起始点和重要的调控区域；利用启动子删除和荧光素酶活性明确启动子功能；利用电泳迁移率变动分析(EMSA)和抗体超迁移实验(super shift)及染色质免疫沉淀方法(CHIP)确定转录因子与rUCP2启动子潜在的顺式作用元件在体内外的结合。
结果：
1.rUCP2基因转录起始点距翻译其始密码子ATG359 bp，起始碱基为C；其上游0.9 kb序列的分析结果显示，该启动子缺乏TATA盒和CAAT盒，而富含GCbp。
2.rUCP2基因转录起始点上游-264～-60存在一段包含Spl序列在内的较强的正调控顺式作用元件区域。共转染Spl表达载体有助于增强rUCP2该段启动子活性。
3.EMSA和super shift实验表明rUCP2基因转录起始点上游-101～-61片段在体外能与转录因子Spl特异性结合。CHIP实验证实转录因子Spl与rUCP2基因转录起始点上游-264～-60片段特异性结合，促进H4IIE细胞rUCP2基因的表达。
结论：rUCP2基因转录起始点距翻译其始密码子ATG359 bp。转录因子Spl激活rUCP2基本启动子活性。转录因子Spl在H4IIE细胞UCP2基因表达转录调控中发挥重要的正调控作用。
第二部分、NASH大鼠肝脏UCP2的表达及转录调控
非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis，NASH)因近年来发病率明显增加和进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌的风险，日益引起人们重视。氧化应激和脂质过氧化是其NASH发病的中心环节。而UCP2具有调节活性氧生成的作用，可能与NASH发病机制有关。
为了明确UCP2在NASH大鼠肝脏的表达水平，我们采用高脂饲料(88％普通饲料加10％猪油和2％胆固醇)喂养大鼠12周和16周，建立NASH大鼠模型。采用HE染色和油红O染色及透射电镜的方法，观察NASH大鼠形态学改变；利用生物化学方法，检测肝功能、血糖、血脂和肝组织SOD、GSH-PX及CAT活性；采用荧光素酶-荧光素法测定NASH大鼠肝线粒体ATP水平；采用Western方法、免疫组织化学方法和实时定量逆转录多聚酶扩增反应(Real time RT-PCR)方法，检测NASH大鼠肝脏rUCP2蛋白和mRNA水平；利用EMSA方法确定rUCP2基因转录起始点上游-101～-61片段在NASH大鼠肝脏转录调控的特异性。
结果：
1.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠肝指数明显增加。肝脏体积增大，重量增加，颜色灰黄，包膜紧张，边缘变钝，质地较脆，切面油腻，颗粒粗糙，有少量局灶性黄白色不规则病灶，以模型16周组大鼠尤为显著。
2.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠肝脏呈中/重度肝细胞大小泡混合性脂肪变，伴有肝细胞气球样变，小叶内炎细胞浸润和局灶性坏死。油红O染色结果证实，NASH模型12周和16周组大鼠肝细胞内充满红色粗大颗粒样脂滴。
3.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠肝脏超微结构损伤，以线粒体更为显著。线粒体肿大、基质疏松、嵴排列紊乱。并可见窦周隙胶原纤维沉积。
4.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠血清ALT、AST、GLU和LDL均显著升高，NASH模型16周组大鼠血清TC显著升高(P＜0.05)。
5.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠肝线粒体ATP水平明显下降，大约是对照组的50％(P＜0.01)。
6.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠肝组织GSH-PX、SOD和CAT的水平明显下降(P＜0.05)。
7.与对照组比较，NASH模型12周和16周组大鼠肝脏rUCP2蛋白水平和rUCP2 mRNA水平明显升高，大约是对照组的3.5倍(P＜0.01)。
8.rUCP2基因转录起始点上游-101～-61片段与NASH模型16周组大鼠肝脏核蛋白之间特异性结合明显增强，初步证实转录因子Spl介导NASH大鼠rUCP2基因的转录调控。
结论：NASH大鼠肝脏rUCP2蛋白及mRNA水平增高，转录因子Spl介导NASH大鼠UCP2基因的转录调控。NASH大鼠肝脏GSH-PX、SOD和CAT活性下降；NASH大鼠肝脏线粒体受损，ATP水平明显降低。