假俭草突变体抗旱生理分析及抗旱基因筛选

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随着经济的发展,我国对草坪草的利用程度逐渐增加,向来具有“懒人草”的假俭草由于缺水造成干旱而面临着养护难的问题。了解干旱胁迫下假俭草的抗旱机制可为假俭草的抗旱育种提供理论支撑。本研究通过对干旱胁迫下假俭草抗旱突变体22-1和野生型3-1进行抗旱生理生化的鉴定以及转录组测序分析,剖析假俭草抗旱突变体的抗旱机制,且根据转录组测序数据的结果,克隆并初步分析了几个干旱相关的基因。主要研究结果如下:1)干旱胁迫对假俭草的生长发育造成了影响,伴随着干旱胁迫时间的延长,叶片萎蔫,叶绿素含量、叶绿素荧光值以及叶片相对含水量降低,叶片相对电导率升高。抗旱突变体22-1的叶绿素含量、叶绿素荧光值及叶片相对含水量比野生型3-1高,叶片相对电导率比野生型3-1低。2)干旱胁迫对假俭草生理生化活动造成了严重的影响,抗氧化酶SOD、CAT、POD活性呈先上升后下降的趋势,MDA含量及脯氨酸含量升高。抗旱突变体22-1的抗氧化酶活性高于野生型3-1,积累的MDA、脯氨酸比3-1少。3)通过转录组测序,共得到159192条Unigenes,共51094个基因在根系与叶片中显著差异表达,77.77%的转录本得到注释。GO功能注释到生物过程、细胞组分和分子功能的占比分别是48.1%、30%、21.9%。在根系中GO富集以生物过程中的蛋白磷酸化、分子功能中的二磷酸腺苷结合和脂质结合为主,叶片中则以碳水化合物衍生物的结合、转移酶活性、过渡金属离子结合为主。4)共39305条Unigenes被注释到KOG数据库,以核糖体结构和生物发生、蛋白质翻转与伴侣相关的转录后调控修饰的注释为主。植物激素信号传导、苯丙烷生物合成、类胡萝卜素的生物合成以及光合作用是KEGG注释及KEGG代谢通路中显著富集的途径。5)通过分析,共识别到51960个SSR位点、625079个SNPs和216235个Indels,经过WGCNA基因共表达网络分析,得到9个与干旱相关的模块。6)克隆了干旱相关基因Eo MYB3R-3、Eo MYB41、Eo WRKY65和Eo HOX14,相关生物信息学分析表明:四个基因依序包含一个849bp、1032bp、906bp、690bp的开放阅读框,分别编码282、343、301、229个氨基酸;蛋白亚细胞定位表明,Eo MYB3R-3基因位定于细胞外,其余定位于细胞核;同源进化树显示假俭草与高粱、玉米等禾本科类的植物亲缘关系较近,与油棕、芭蕉等亲缘关系较远。
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