胸腺肽α1ELISA检测方法的建立及其临床应用

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研究背景:胸腺肽α1(thymosin α1,简称Tα1)是含有28个氨基酸的酸性多肽,具有乙酰化的氨基端。它最早是由牛胸腺中提取的一种称为胸腺组分5中分离出来的多肽,普遍存在于哺乳动物的各种组织细胞中,具有极强的提高免疫功能的活性。它可诱导T细胞表面标志的产生,诱导包括巨噬细胞移动抑制因子、干扰素和白细胞介素等淋巴因子的产生,从而发挥调节机体免疫功能的作用。已有的研究表明,在AIDS、乙型肝炎和丙型肝炎患者中,Tα1表达水平低于正常水平,而在肿瘤患者中有高水平的表达。因此,Tα1有可能在许多疾病状态中发挥一定的作用。 目的:建立检测Tα1的特异的酶联免疫吸附检测方法,并检测正常和病理状态下成人血浆或血清Tα1的水平,了解Tα1的水平与病理状态的关系。 方法:制备兔抗Tα1的抗血清,建立Tα1的ELISA检测方法。分别检测正常成人、慢性ITP、非免疫性血小板减少、肿瘤、糖尿病以及肾脏疾病患者的血浆或血清Tα1水平。并对慢性ITP患者血浆Tα1水平与血小板相关抗体水平的相关性进行了研究,同时观察了Tα1水平与肿瘤的恶性程度、浸润、转移以及不同的治疗干预措施的关系。 结果:ELISA法检测Tα1的最小可测值为0.16μg/L,平均回收率为108.8%,批内及批间CV分别为(7.05±2.89)%和(11.44±2.84)%。63名健康成人血浆Tα1的水平为(0.78±0.34)μg/L,64例健康成人血清Tα1水平为(0.69±0.24)μg/L,健康成人随着年龄的增长Tα1水平有所下降,但无显著性差异。与健康成人相比,慢性ITP患者血浆Tα1水平降低,为(0.60±0.34)μg/L,差异有高度显著意义(P<0.001);而非免疫性血小板减少患者血浆Tα1水平与健康成人相比无明显改变,慢性ITP患者与非免疫性血小板减少患者血浆Tα1水平之间存在高度显著性差异(P<0.05)。良、恶性肿瘤患者血清Tα1水平均较正常成人明显增高(P<0.001),其中又以恶性肿瘤患者Tα1水平增高更为显著,良性肿瘤和恶性肿瘤患者之间差别有显著性(P<0.05)。恶性肿瘤患者中,Tα1水平与肿瘤的恶性程度、肿瘤的浸润、转移以及不同的治疗干预有关。与正常对照组胸腺肤。IELIsA检测方法的建.’l_及〕训臼床应用中文摘要相比,1型糖尿病患者血浆Tal水平明显低于正常对照组(P<0.01),而2型糖尿病患者血浆Tal水平与正常对照无明显差异,1型和2型糖尿病患者相比血浆Tal水平之间的差异有显著意义(P<0.05)。肾脏疾病患者的血浆Tal水平均低于正常对照组(P均<0.01),而与肾功能无明显相关性。免疫性肾脏疾病血浆Tal水平明显低于非免疫性肾脏疾病和正常对照组,差异有显著性 (P<0.001),非免疫性肾脏疾病和正常对照组相比无显著性差异。 结论:首先在国内建立了Tal的酶联免疫吸附检测方法,该方法敏感性好、特异性高、重复性好,准确性也较高。血清或血浆Tal的检测有助于反映免疫性疾病和肿瘤的病理状态,提示可以作为一种新的免疫性指标和新的肿瘤标志物。
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