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1研究目的1.1临床研究:收集并研究阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者的病例资料,归纳并分析其中医证候分布规律及其常见的中医证型,为更好的临床诊治OSAHS提供可靠的理论依据。1.2网络药理学研究:基于网络药理学研究方法,探讨鼾宁方治疗OSAHS的生物学过程和信号通路,为后续实验研究提供理论依据。1.3实验研究:通过建立OSASH小鼠模型,模拟OSAHS患者体内的间歇性低氧状态,以相关指标和P38MAPK/NF-κB信号通路为切入点,探究鼾宁方对OSAHS的治疗作用及作用机制,为后期鼾宁方的临床应用提供科学依据。2方法2.1临床研究:通过文献研究制定出OSAHS患者中医证候学调查表,对入组的338例患者的证候学资料进行统计学分析,归纳其一般资料、临床症状等信息,并总结出OSAHS患者在中医证候上的特点和规律。2.2网络药理学研究:基于网络药理学的研究策略,使用TCMSP、BATMAN、Gene Cards、OMIM、Uniprot等资源平台对鼾宁方的潜在靶点进行预测,以分析得到的基因集作为疾病靶点,通过PPI网络进一步筛选后确认鼾宁方治疗OSAHS的核心靶点;最后进行GO和KEGG通路富集分析,预测鼾宁方对OSAHS发挥治疗作用的分子机制。2.3动物实验:将50只SPF小鼠进行随机分组,分为空白组、模型组、鼾宁方低剂量组、鼾宁方中剂量组和鼾宁方高剂量组。除空白组外,其余4组小鼠进行间歇性低氧（CIH）造模,每天8h,持续2周。造模成功后,中药治疗组在CIH基础上再予以不同浓度鼾宁方灌胃,给药14天后留取标本。采用HE染色法对小鼠的肺组织进行病理学观察;ELISA法检测小大鼠血清SOD、MDA、IL-4、IL-6和IL-10的表达含量;RT-q PCR检测OSAHS小鼠P38MAPKm RNA、IκBm RNA表达水平;Western blot方法测定肺组织p38、p-p38、IκBα、p-IκBα蛋白表达。3结果3.1临床研究3.1.1基本信息资料:338例OSAHS患者中,男﹕女=37.42﹕1,以男性患者为主;有吸烟史占34.91%,有饮酒史占49.11%;BMI＞24kg/m~2的人数,即超重和肥胖人数达172例,占50.89%;合并疾病中以心脑系统、呼吸系统、代谢性疾病为主;病情严重程度以重度为主,占比57.40%。3.1.2中医证候学结果:OSAHS患者主要中医症状表现为夜间打鼾、鼾声响亮、夜间憋醒、面色萎黄、张口呼吸、记忆力下降、肢体困重、咽中堵塞感、嗜睡、多梦、头晕、乏力、形体肥胖等;中医证候统计结果显示,痰热内蕴证112例（占33.14%）,痰湿内阻证87例（占25.74%）,痰瘀互结证51例（占15.09%）,肺脾气虚证35例（占10.35%）,气虚痰瘀证29例（占8.58%）,脾肾两虚证24例（占7.10%）。3.2网络药理学研究3.2.1鼾宁方活性成分和靶点:使用TCMSP数据库和BATMAN数据库,检索出鼾宁方的中药有效活性成分,共计2046个活性成分。再借助Uniprot数据库对候选活性成分名称标准化,去重后共得到269个鼾宁方有效成分作用靶点。其中鼾宁方主要有效成分有槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、β谷甾醇、丹参酮ⅡA等。3.2.2鼾宁方药物和疾病靶点筛选:基于Gene Cards数据库筛选OSAHS的相关靶点共3926个,药物和疾病的交集靶点共有148个。3.2.3鼾宁方活性成分-靶点网络:鼾宁方“活性成分—作用靶点”网络由298个节点和1319条边组成。主要作用靶点有148个关键靶点。包括IL-4、TNF-α、MAPK、MAPK3、MAPK14、CASp3、AKT1等。3.2.4蛋白质相互作用（PPI）网络:基于String数据库构建鼾宁方治疗OSAHS的PPI网络,筛选出的核心基因有:IL4、TNF、MAPK1、MAPK3、MAPK14等。3.2.5 GO和KEGG通路富集分析:GO富集分析结果包括2509条细胞组分、217条生物学过程和113条分子功能,涉及氧化应激反应、缺氧的反应、对脂多糖的反应、对营养水平的反应等。KEGG通路富集分析结果包括184通路,主要有P38MAPK信号通路、PI3K-Ak信号通路、HIF-1信号通路、IL-1信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路等。3.3动物实验3.3.1HE染色:空白组小鼠肺部形态基本正常,组织结构较为完整,且厚薄适中,无炎性细胞浸润,肺泡间隔未见明显增厚。模型组小鼠肺部形态改变,出现肺泡排列散乱,结构破坏明显,部分肺泡扩张,肺间质增厚,炎性细胞浸润明显;鼾宁方低剂量组小鼠肺泡结构稍破坏,部分肺泡扩张,肺间质稍增厚,有炎性细胞浸润;鼾宁方中剂量组小鼠肺部组织可见肺泡结构破坏程度减轻,肺间质轻度增厚,可见少量炎性细胞浸润;鼾宁方高剂量组肺组织切片可见肺泡结构稍有破坏,肺间质轻度增厚,散在的炎性细胞浸润,较模型组有明显减轻。3.3.2CD4+T淋巴细胞百分比:将CIH各组与空白对照组相比较发现,CIH各组的CD4+T淋巴细胞百分比均显著下降,其中模型组下降最为明显。而与模型组相比,鼾宁方各剂量组CD4+T细胞亚群百分比均有所上升,其中鼾宁方中、高剂量组上升更为明显。3.3.3MDA、SOD表达:CIH各组血清中的MDA表达水平明显升高,SOD表达水平有所降低,与空白组比较差异具有统计学意义（p＜0.01）。与模型组相比,鼾宁方低、中、高剂量中MDA的水平均有不同程度的降低,以鼾宁方高剂量降低最为明显;与之相反,与模型组相比,鼾宁方各剂量组表达水平均有所升高。与鼾宁方低剂量组相比,中、高剂量组升高SOD表达水平升高明显,鼾宁方高剂量组比中剂量组SOD表达水平明显上升。3.3.4IL-4、IL-6、IL-10和TNF-α表达:与空白组相比,各CIH组血清中IL-4和IL-10表达水平明显降低,而鼾宁方各剂量组小鼠血清中IL-4和IL-10表达均有不同程度升高,以鼾宁方高剂量组上升最为明显（p＜0.01）;与之相反,IL-6和TNF-α在模型组的表达水平较空白组显著升高,鼾宁方各剂量组中IL-6和TNF-α表达水平逐渐减少,以鼾宁方高剂量组减少更为明显（p＜0.01）。3.3.5 p38m RNA、IκB-αm RNA的表达:与空白组相比,各CIH组小鼠肺组织中p38m RNA相对表达水平上升,IκB-αm RNA相对表达水平下降。而与模型组相比较,鼾宁方各剂量组小鼠肺组织中p38m RNA的相对表达水平显著降低（p＜0.01）,其中鼾宁方中、高剂量IκB-α的m RNA相对表达水平明显升高（p＜0.01）,而鼾宁方低剂量组IκB-α表达水平与模型组差异无统计学差异。3.3.6 p38、p-p38、IκBα、p-IκBα蛋白表达:与空白组相比,各CIH组p38、p-p38蛋白的表达水平升高,IκBα、p-IκBα蛋白表达水平下降;与模型组相比,鼾宁方各剂量组中p38、p-p38蛋白表达降低,IκBα、p-IκBα蛋白表达升高。其中鼾宁方高剂量组降低p38、p-p38蛋白表达能力和升高IκBα、p-IκBα蛋白表达的能力明显优于低、中剂量组。4结论4.1证候学调查研究发现,在调查的338例阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者中,男性的发病率远高于女性,并且OSAHS患者中肥胖人群的比例较高,吸烟和饮酒者居多,合并疾病中以心脑系统、呼吸系统、代谢性疾病为主。中医证候方面,以痰热内蕴证患者为主,其余从高到低排列顺序为:痰湿内阻证＞痰瘀互结证＞肺脾气虚证＞气虚痰瘀证＞脾肾两虚证。4.2网络药理学分析结果表明:鼾宁方治疗OSAHS的主要活性成分有槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、丹参酮ⅡA、β谷甾醇等,主要作用于IL-4、TNF-α、MAPK1、MAPK3、MAPK14、CASp3、AKT1等靶点,通过对P38MAPK信号通路、HIF-1信号通路、IL-1信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路、PI3K-Ak信号通路等的调节,抑制间歇性低氧引发的炎症反应,调节自身免疫,改善细胞凋亡,达到改善临床症状、延缓OSAHS病程的作用。4.3通过动物实验研究发现,鼾宁方可通过抑制P38MAPK/NF-κB信号在细胞中的传导,从而调节机体免疫功能,减轻炎性细胞浸润、缓解组织的炎症反应,对OSAHS起到治疗作用。