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植物体内有一系列基因抵抗病原侵染,以保证植物的正常生长。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是植物针对病毒侵染的一个重要的应答反应。人工微RNA(artificial microRNA,amiRNA)是一种高效沉默基因表达的第二代RNAi技术,是利用天然miRNA的生成和作用原理设计的,以调控生物体内某一个或多个基因的表达的一项新的基因沉默技术。病毒诱导的基因沉默(VIGS)也是沉默植物基因的有力手段。使用amiRNA的VIGS(MIR VIGS)是一种新开发的植物反向遗传学研究技术,其兼具amiRNA和VIGS技术的优势。本氏烟草(Nicotiana benthamiana)对超过500种不同的病毒敏感,广泛应用于植物与病原微生物相互作用以及高等植物基因功能的研究中,并且可以作为VIGS的良好宿主。植物的RNA沉默途径中的几乎所有的基因都已在拟南芥中发现和功能验证。但是在本氏烟草中RNA沉默途径相关基因的研究鲜有报道。本研究对本氏烟草中RNA沉默途径相关的11条基因(AGO1a、AGO1b、AG02、DCL2、DCL3、DCL4、DRB4、HEN1、RDR1、RDR6、SGS3)进行干扰研究。载体构建成功后通过瞬时表达实验分析,得到了如下结论:1)利用MIR VIGS技术在植物病毒载体pCVA中构建了32个干扰载体,沉默了其中9条基因,沉默效率均在50%以上;2)利用amiRNA技术在植物双元表达载体pBI121(Kpn Ⅰ)中构建了 8个干扰载体,沉默了其中7条基因,沉默效率均在45%以上,其沉默效率整体上不如病毒载体pCVA的沉默效率高;3)农杆菌介导法侵染本氏烟草,病毒载体pCVA和病毒共侵染存在强烈的竞争关系,而植物双元载体pBI121和病毒在侵染液浓度较低(如OD600=0.1)时共侵染则互不影响;4)利用植物双元载体pBI121瞬时表达,在侵染液浓度为OD600=0.1的条件下,NbAG02基因的下调使本氏烟草抗烟草花叶病毒(pJL24)的能力显著减弱,而NbAGO1a、AGO1b、NbRDR1、NbDCL2基因的下调与烟草花叶病毒则没有关系。