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本文采用96孔微板法以及TLC薄层生物自显影方法,对48种中药材的乙醇提取物及水提物进行了乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性的筛选。结果显示香薷、盐益智仁、生地黄以及荷叶的乙醇提取物具有较强的AChE抑制活性,它们在终浓度0.1mg/mL时对AChE的抑制率分别为(68.63±1.12)%、(44.49±3.66)%、(43.78±4.76)%和(42.63±8.31)%。
在此基础上,本文对其中AChE抑制活性较好且文献报道具有神经保护和提高学习记忆等药理作用的盐益智仁进行了系统的化学成分研究,利用柱色谱法对盐益智仁95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行了化学成分的分离,采用1D-NMR、2D-NMR、HR-ESI-MS、IR、CD和UV等对化合物进行了结构鉴定,从中分离并鉴定了23个化合物,包括21个倍半萜:11S-12-chloro-nootkatone-11-ol(1)、11R-12-chloro-nootkatone-11-ol(2)、12-nornootkatone-6-ene-11-one(3)、nootkatone(4)、(+)-(3S,4aS,5R)-3-isopropenyl-4a,5-dimethyl-2,3,4,4a,5,6-hexahydro-1,7-naphthoquinone(5)、nootkatene(6)、9β-hydroxy-nootkatone(7)、2β-hydroxy-δ-cadinol(8)、oxyphyllenodiolA(9)、oxyphyllenodiolB(10)、4-isopropyl-6-methyl-1-tetralone(11)、oxyphylloneE(12)、oxyphylloneD(13)、7-epi-teucrenoneB(14)、oxyphyllaneneB(15)、oxyphylloneA(16)、oxyphyllolE(17)、(9E)-humulene-2,3;6,7-diepoxide(18)、alpinenone(19)、mustakone(20)和pubescone(21),以及2个甾体化合物:β-谷甾醇(β-sitosterol,22)、豆甾醇(stigmasterol,23)。其中,化合物1~3为新化合物,化合物8为一个新的天然产物,化合物5、7、20、21为首次从姜科植物中分离获得,化合物5、6、7、11、19、20、21为首次从益智仁中分离获得。
本文进一步采用96孔微板法和TLC薄层生物自显影方法对20个倍半萜(1~5,7~21)进行了体外抗AChE活性筛选。TLC薄层生物自显影显示化合物1~4、7、14、16、18、19和21在10nmol时具有AChE抑制活性,96孔微板法进一步表明化合物19、18、16、21在100μM时显示了中等或较弱的AChE抑制活性,抑制率分别为(56.14±1.86)%、(22.23±2.24)%、(16.23±1.14)%和(10.09±0.27)%,其中,化合物19的乙酰胆碱酯酶抑制活性最高,且呈剂量依赖关系,IC50值为81.65μM。
采用GC-MS方法对益智仁盐炙前后挥发油的化学成分进行了定性测定,从生益智仁和盐益智仁分别鉴定出29个化合物。除利用水蒸气蒸馏法获得的挥发油提取率有所降低外,盐益智仁挥发油所含化学成分和生益智仁并无明显区别,所含化学成分的相对含量亦无明显变化,其主要成分均为圆柚酮和瓦伦亚烯。益智仁盐炙前后的的挥发油均对AChE显示了一定的抑制活性。