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第一部分TGF-β1诱导胆囊癌EMT发生中差异表达基因分析目的为研究胆囊癌侵袭转移的可能机制,我们利用TGF-β1诱导胆囊癌GBC-SD细胞发生上皮-间质转化(EMT),然后应用基因芯片技术检测GBC-SD细胞与发生EMT的GBC-SD细胞的基因,分析其差异表达的基因。方法使用5ng/ml的TGF-β1诱导胆囊癌GBC-SD细胞株,分别提取该组和未经诱导的胆囊癌GBC-SD细胞株组的总RNA,纯化后再进行荧光标记、对寡核苷酸芯片进行杂交,激光扫描仪对其进行扫描,根据荧光强度来筛选出两者之间的差异基因,然后进行在线生物信息学分析。结果基因芯片实验共筛选出264个在胆囊癌GBC-SD细胞和经TGF-β1诱导后胆囊癌GBC-SD细胞间表达差异的基因。166个基因在经TGF-β1诱导后胆囊癌GBC-SD细胞组中表达上调,98个基因表达下调,经基因功能分类注释系统查询(GO分类),他们涉及到细胞粘附、细胞周期等；信号通路分析发现他们涉及到细胞周期蛋白调节、磷酸肌醇介导的信号通路等。结论我们利用基因芯片技术检测胆囊癌GBC-SD细胞及TGF-β1诱导发生EMT后的胆囊癌GBC-SD细胞差异表达的基因。结合文献检索分析我们认为NT5E和FcGBP可能涉及到胆囊癌的侵袭转移过程,因此将这两个基因作为下一步深入研究的目标。第二部分NT5E和FcGBP基因及其蛋白在胆囊癌组织中的表达及意义目的通过检测胆囊腺癌及慢性胆囊炎组织中NT5E和FcGBP的mRNA和蛋白质的表达,验证第一部分基因芯片的结果,并探讨这两个蛋白与胆囊癌侵袭转移的关系。方法随机收取了15例未行放化疗患者的胆囊腺癌标本和15例慢性结石性胆囊炎患者的慢性胆囊炎标本,获取其总RNA和总蛋白。NT5E和：FcGBP的mRNA表达水平采用定量RT-PCR检测；NT5E和FcGBP的蛋白质表达水平采用Western-blot检测。结果1.通过定量RT-PCR分析显示,胆囊腺癌NT5EmRNA的表达明显上调,与慢性胆囊炎比较有高度显著差异(1.012+0.019vs0.225±0.021,P<0.01)；而FcGBP mRNA在胆囊腺癌中的表达则与此相反,为明显下调且有高度显著差异(0.078±0.020vs0.321+0.017,P<0.01)。2.通过Western-blot分析发现NT5E蛋白在胆囊腺癌中的表达有明显上调,与慢性胆囊炎比较有高度显著差异(0.826±0.011vs0.412±0.017,P<0.01)；而FcGBP蛋白在胆囊腺癌中的表达有明显下调,与慢性胆囊炎比较有高度显著差异(0.084±0.017vs0.187±0.025,P<0.01)。结论胆囊腺癌中的NT5E mRNA以及其蛋白较慢性胆囊炎中的明显高表达,而FcGBP mRNA则相反,为低表达,这正与前述基因芯片结果相符合：NT5E、FcGBP基因可能从两个相反的方面涉及胆囊癌EMT调节,进而与胆囊癌侵袭转移相关。第三部分胆囊良恶性病变组织中NT5E和FcGBP的表达及其临床病理意义目的检测胆囊腺癌及其癌旁组织、腺瘤、息肉和慢性胆囊炎标本中NT5E和FcGBP的表达,探讨其在胆囊良恶性病变中的临床病理意义以及与胆囊腺癌侵袭转移的关系。方法共收集到了108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、30例腺瘤、15例息肉和35例慢性胆囊炎组织标本切片,采用En Vision免疫组化二步法对NT5E和FcGBP进行染色,整理数据后利用SPSS软件分析。结果(1)108例胆囊腺癌中NT5E阳性表达为59例(54.6%),46例癌旁组织中14例阳性(30.4%),30例腺瘤中5例阳性(16.7%),15例息肉中2例阳性(13.3%),35例慢性胆囊炎胆囊上皮中4例阳性(11.4%)：胆囊腺癌中NT5E表达阳性率显著高于癌旁组织、腺瘤、息肉和慢性胆囊炎胆囊上皮,差异均有高度显著性(P<0.01)；另一方面108例胆囊腺癌中FcGBP阳性表达为52例(48.1%),46例癌旁组织中中阳性为35例(76.1%),30例腺瘤中阳性为24例(80.0%),15例息肉中阳性为13例(86.7%),35例慢性胆囊炎胆囊上皮中阳性为30例(85.7%),FcGBP在胆囊腺癌中的阳性表达率明显低于其在癌旁组织、腺瘤、息肉和慢性胆囊炎胆囊上皮中的阳性表达率,并有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。此外,良性病变的胆囊上皮不论NT5E阳性表达、FcGBP阴性表达,光镜下均可见呈不同程度不典型增生。(2)NT5E在高分化的腺癌、最大直径<2cm的肿块以及无淋巴结转移、无周围组织侵犯的病例中,其阳性表达率明显低于其在低分化的腺癌、最大直径≥2cm肿块以及发现淋巴结转移和周围组织浸润的病例的阳性表达率(P<0.05或P<0.01)；但FcGBP在上述组织中的表达阳性率结果与NT5E相反(P<0.05或P<0.01)；(3)采用Kaplan-Meier单因素生存分析,发现胆囊癌患者术后的平均生存期与其病理类型、有无淋巴结转移、肿块最大直径、周围组织侵犯的状况等均有密切关系(P<0.05或P<0.01)；NT5E表达阳性的患者术后生存期明显低于阴性表达的患者(P<0.05),而FcGBP阳性表达的患者则生存期明显长于其阴性表达的患者(P<0.05)。NT5E阳性表达、FcGBP阴性表达患者的生存时间显著少于NT5E阴性表达、FcGBP阳性表达患者(P<0.01)；Cox回归多因素分析也表明NT5E表达阳性(P=0.019)或FcGBP表达阴性(P=0.004)均是胆囊腺癌预后不良的评价指标。结论NT5E及FcGBP表达水平均为反映胆囊癌发生、进展以及临床生物学行为的重要指标；NT5E阳性表达者和(或)FcGBP阴性表达者预后较差。