【摘 要】
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背景:缺血再灌注（IR）和炎症反应是导致肾脏移植损伤的常见原因。目前的病理学证据已证明,IR可以导致肾小管上皮细胞的蛋白水解和细胞外基质（ECM）的破坏。一些基质金属蛋白酶（MMP）,例如MMP-2和MMP-9,可以在ECM的水解和重塑中发挥作用。并且中性粒细胞分泌的MMP-9的急性积累可以加剧炎症的发生并导致移植物损伤。因此,本研究的目的是探究肾小管上皮细胞在缺氧再灌注损伤（HR）过程中基质金属
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背景:缺血再灌注（IR）和炎症反应是导致肾脏移植损伤的常见原因。目前的病理学证据已证明,IR可以导致肾小管上皮细胞的蛋白水解和细胞外基质（ECM）的破坏。一些基质金属蛋白酶（MMP）,例如MMP-2和MMP-9,可以在ECM的水解和重塑中发挥作用。并且中性粒细胞分泌的MMP-9的急性积累可以加剧炎症的发生并导致移植物损伤。因此,本研究的目的是探究肾小管上皮细胞在缺氧再灌注损伤（HR）过程中基质金属蛋白酶,其中包括MMP-9和MMP-2的表达水平的变化及其与中性粒细胞相关炎症反应的相关性。方法:本研究使用三气细胞培养箱来建立HR模型。通过将HK-2细胞在缺血条件下（5%CO2,1%O2）放置6小时,然后在再灌注条件下（5%CO2,21%O2）放置12小时,从而建立了该模型。收集细胞培养基上清液以培养中性粒细胞。中性粒细胞通过收集健康志愿者提供的外周血,离心纯化而获得。BB-94（MMP-9抑制剂）用于添加到抑制剂组的培养基中。使用活性氧（ROS）特异性荧光探针并通过荧光显微镜和流式细胞仪检测用于验证HR模型的建立条件和抑制剂的干预条件。通过RT-q PCR法和蛋白质印迹法评估HK-2细胞和中性粒细胞中MMP-9和MMP-2的表达。通过RT-q PCR法评估CD11b和CD18的表达以确认中性粒细胞的活性。通过酶活性检测髓过氧化物酶（MPO）的活性,以评估中性粒细胞炎症激活的程度。结果:流式细胞检测提示,HR组HK-2细胞的ROS水平较对照组显著升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-q PCR法和蛋白质印迹法检测提示,HR组HK-2细胞MMP-9表达较对照组显著升高,MMP-2表达较对照组显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。MPO酶活性检测提示,HR组PMN细胞的MMP-9和MPO的表达较对照组显著升高,抑制剂组MPO的表达较HR组显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:HR可增加肾脏近端小管上皮细胞中MMP-9的表达,并降低MMP-2的表达。在再灌注过程中,HR增加了中性粒细胞中MMP-9和MPO的表达。结果表明,MMP-9和MMP-2是缺氧-再灌注损伤中潜在的病理生理机制的重要组成部分。抑制MMP-9可以是减轻肾脏移植后肾小管上皮细胞HR相关损伤和中性粒细胞相关炎症损伤的潜在途径。
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