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[目的]本研究旨在探讨温肾益气颗粒对COPD大鼠的治疗作用和机制,明确温肾益气颗粒对COPD大鼠气道炎症、细胞凋亡的影响,结合细胞水平探究温肾益气颗粒是否通过激活SIRT1/PPARy通路从而抑制NLRP3炎症小体活化,减少细胞炎症和凋亡的分子机制。[方法]一、动物实验:分析温肾益气颗粒对COPD大鼠气道炎症的抑制作用,分析其对组织细胞凋亡、NLRP3炎症小体激活及SIRT1/PPARγ表达的影响采用烟熏联合气道注射LPS构建COPD大鼠模型,采用不同剂量温肾益气颗粒和阳性对照药物地塞米松对COPD大鼠进行干预,迈格吉染色检测大鼠肺泡灌洗液中白细胞分类和数量;HE染色观察大鼠肺组织炎症细胞浸润程度;TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡;MPO试剂盒检测肺组织MPO活力;ELISA检测大鼠血清、肺泡灌洗液、肺组织匀浆中INF-γ、TNF-α、IL-18和IL-1β含量;Western Blot、qRT-PCR分别检测大鼠肺组织中SIRT1、PPARγ、NLRP3炎症小体和凋亡相关蛋白表达及mRNA水平;免疫组化检测PPARγ和SIRT1在肺组织中的表达分布。动物水平明确温肾益气颗粒对COPD大鼠气道炎症及细胞凋亡,细胞内NLRP3炎症小体和SIRT1/PPARγ表达的影响。二、细胞实验:探究温肾益气颗粒激活SIRT1/PPARγ通路抑制NLRP3炎症小体活化,从而减少Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症和凋亡的分子机制1.温肾益气含药血清对香烟烟雾提取物刺激的Ⅱ型肺泡上皮细胞中SIRT1/PPARγ通路、NLRP3表达,细胞凋亡和炎症因子分泌的影响:以Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECII)为研究对象,采用10%香烟烟雾提取物(CSE)处理构造COPD细胞模型,温肾益气含药血清进行干预。CCK-8检测细胞活力改变;EdU染色检测细胞增殖改变;流式细胞术检测细胞凋亡比例;ELISA检测细胞上清液中INF-γ、TNF-α、IL-18和IL-1β含量。Western blot和qRT-PCR检测细胞SIRT1、PPARγ、NLRP3炎症小体和凋亡相关蛋白表达及mRNA水平。2.温肾益气颗粒激活SIRT1/PPARy通路抑制NLRP3活化,减少细胞炎症和凋亡的作用:利用小干扰RNA对AECⅡ细胞SIRT1基因进行沉默,PPAR γ激动剂曲格列酮上调AECⅡ细胞PPAR γ表达,温肾益气含药血清联合SIRT1/PPARγ通路干预COPD细胞模型。CCK-8检测细胞活力改变;EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡比例;ELISA 检测细胞上清液中 INF-γ、TNF-α、IL-18 和 IL-1β含量。Western blot 和 qRT-PCR法检测细胞NLRP3炎症小体和凋亡相关蛋白表达及mRNA水平。[结果]温肾益气颗粒可显著改善COPD大鼠肺部炎症损伤,抑制肺组织MPO表达和细胞凋亡,降低血清、肺泡灌洗液、肺组织匀浆中INF-γ、TNF-α、IL-18和IL-1β含量,抑制肺组织中NLRP3、ACS、Caspase-1、IL-18、IL-1β和BAX蛋白表达及mRNA水平;促进BCL2表达和PPARy及SIRT1在肺组织中的表达分布。温肾益气含药血清处理CSE刺激COPD细胞模型,细胞活力升高,凋亡减少,INF-γ、TNF-α、IL-18和IL-1β含量降低,BCL2、PPARγ及 SIRT1 蛋白表达和 mRNA 水平升高,NLRP3、ACS、Caspase-1、IL-18、IL-1β、BAX蛋白表达及mRNA水平降低。敲低SIRT1逆转温肾益气含药血清对CSE刺激的COPD细胞损伤的改善作用,PPARγ激动剂曲格列酮恢复温肾益气含药血清对CSE刺激COPD细胞损伤的改善作用。[结论]温肾益气颗粒通过激活SIRT1/PPARγ通路抑制NLRP3炎症小体活化,减轻COPD损伤和炎症反应。