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第一部分高氧暴露对A549细胞中CYP1A1、Nrf2和NQO1表达的影响目的探讨高氧暴露下A549细胞中细胞色素P4501A1（cytochrome P4501A1,CYP1A1）、核转录因子E2相关因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2）和NAD（P）H:醌氧化还原酶1（NAD（P）H quinone oxidoreductase 1 enzyme,NQO1）在不同时间点的表达变化,研究CYP1A1、Nrf2、NQO1与早产儿支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）的相关性。方法以A549细胞为研究对象,随机分为2组:空气组和高氧组,高氧组暴露于高浓度氧气中（95%O2,5%CO2）,空气组置于5%CO2培养箱中,2组分别在高氧或空气暴露第12h、24h、48h提取细胞总RNA,采用定量实时聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）、蛋白质印迹法（Western blot,WB）检测两组A549细胞中不同时间点CYP1A1、Nrf2、NQO1的表达变化,并通过F检验进行统计分析。结果（1）与空气组相比,高氧组A549细胞CYP1A1 m RNA及蛋白表达显著上调,且在高氧暴露24h差异最明显（p<0.05）。（2）与空气组相比,高氧组A549细胞中Nrf2、NQO1 m RNA及蛋白表达显著上调,趋势与CYP1A1类似,在高氧暴露24h差异最明显（p<0.05）。结论高氧暴露导致A549细胞中CYP1A1、Nrf2、NQO1表达异常,且在高氧暴露24h时差异最明显,提示CYP1A1、Nrf2、NQO1可能参与BPD中高氧肺损伤的发生发展过程。第二部分FICZ增强/sh RNA抑制高氧暴露A549细胞AHR后Nrf2、NQO1的表达及其与细胞凋亡的关系目的研究6-甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑（6-formylindolo[3,2-b]carbazole,FICZ）增强/短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）抑制高氧暴露A549细胞芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor,AHR）后,Nrf2、NQO1的表达变化及其与细胞凋亡的关系,探讨AHR、Nrf2、NQO1在BPD发生发展过程中的作用。方法分别应用FICZ增强/sh RNA抑制A549细胞中AHR的表达,以二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）高氧组和对照sh RNA高氧组为参照,将A549细胞随机分为6组:组1为无调控空气组;组2为无调控高氧组;组3为FICZ增强高氧组;组4为对照sh RNA高氧组;组5为AHR sh RNA抑制高氧组;组6为DMSO高氧组。高氧组暴露于高浓度氧气中（95%O2,5%CO2）,空气组置于5%CO2培养箱中。6组分别在空气或高氧暴露24h提取细胞总RNA,以CYP1A1的表达情况代表AHR的激活程度,采用q RT-PCR、WB检测CYP1A1、Nrf2、NQO1的表达变化;观察细胞形态学变化及AHR、Nrf2核易位情况;检测各组细胞的活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）产生量;采用流式细胞术检测各组A549细胞的凋亡情况,并通过F检验进行统计分析。结果（1）AHR sh RNA可抑制AHR表达,AHR sh RNAl、AHR sh RNA2、AHR sh RNA3 3组AHR蛋白表达均受到抑制,其中AHR sh RNA2组的抑制效率最高（64.49%）。（2）与无调控空气组相比,无调控高氧组中A549细胞形态萎缩,CYP1A1、Nrf2、NQO1蛋白表达显著上调,AHR、Nrf2蛋白主要分布于细胞核内,ROS产生量增高,细胞凋亡率显著增加（均p<0.05）。（3）与DMSO高氧组相比,FICZ增强高氧组中A549细胞形态萎缩程度较轻,CYP1A1、Nrf2、NQO1表达显著上调,AHR、Nrf2蛋白在细胞核内定位相对增多,ROS产生量相对较少,细胞凋亡率显著降低（均p<0.05）。（4）与对照sh RNA高氧组相比,AHR sh RNA抑制高氧组中A549细胞形态萎缩更显著,CYP1A1、Nrf2、NQO1表达显著下调,AHR、Nrf2蛋白在细胞核内定位相对减少,ROS产生量相对增高,细胞凋亡率显著增高（均p<0.05）。结论高氧暴露激活AHR-Nrf2-NQO1信号通路,Nrf2、NQO1作为AHR的下游靶点,通过降低ROS的产生,减少细胞的损伤和凋亡,共同参与BPD的保护作用。小结1.本研究成功建立A549细胞高氧暴露模型,从细胞水平阐明AHR、Nrf2与NQO1在高氧暴露时对细胞的保护作用及部分机制。2.高氧暴露导致A549细胞中CYP1A1、Nrf2、NQO1表达异常,且在高氧暴露24h时差异最明显,提示CYP1A1、Nrf2、NQO1可能参与BPD中高氧肺损伤的发生发展过程。3.高氧暴露激活AHR-Nrf2-NQO1信号通路,Nrf2、NQO1作为AHR的下游靶点,通过降低ROS的产生,减少细胞的损伤和凋亡,共同参与BPD的保护作用。