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第一部分男性不育精子中CRISP2达分目的：探讨富含半胱氨酸分泌蛋白基因-2(CRISP2)在不同类型的精子发生障碍人群精子中的mRNA水平的转录表达情况,了解CRISP2基因与男性不育的相关性。方法：收集成年男性正常组、弱精子症组和少精子症组精液各50例,采用Percoll梯度液离心分离纯化后,提取精子RNA并逆转录为cDNA。应用实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)的方法,设计了CRISP2基因特异性扩增引物,以正常组、弱精子症组和少精子症组精子cDNA为模板,分别扩增和分析正常精子、异常精子中CRISP2基因的mRNA转录水平,比较各组之间的差异。结果：通过RT-PCR进行目的基因的扩增,分别获得了相应的特异性扩增条带,CRISP2目的基因片段约154bp、内参基因GAPDH目的片段约248bp。随后的QRT-PCR扩增曲线以及融解曲线表明：CRISP2基因和内参基因GAPDH的PCR反应扩增特异性均较强。对实时荧光定量PCR得出的不同来源精子中目的基因的相对表达量进行单因素方差分析结果显示：CRISP2基因在弱精子症患者精子中表达下调,其相对表达量显著低于正常组(2.092±0.969vs.10.281±2.173,P=0.000<0.05),也显著低于少精子症组(2.092±0.969vs.9.420±2.794,P=0.000<0.05),而少精子症组与正常组相对表达量差异不显著(9.420±2.794vs.10.281±2.173,P=0.203>0.05)。结论：CRISP2基因在不同类型精子发生障碍男性精子中的表达水平显著不同,弱精子症患者的精子中CRISP2基因mRNA表达水平显著下调,而少精子症表达水平与对照组相当,提示CRISP2基因有望成为潜在的分子诊断标记物,用于弱精子症的诊断研究,并对揭示弱精子症发生的分子机制提供了参考。第二部分广西弱精子症患CRISP2基因的多态性研究目的：应用DNA测序技术(DNA sequencing)对富含半胱氨酸分泌蛋白基因-2(CRISP2)的基因多态性进行分析,初步探讨CRISP2基因多态性与广西弱精子症患者之间的关系。方法：通过构建弱精子症男性与正常精液男性两种DNA样本池,分别对CRISP2基因的全部外显子序列与上游2000bp的5’调控序列进行PCR扩增,扩增产物经北京华大基因研究中心DNA全自动测序仪自动测序。应用chromas、clustalxl.83等软件分析测序结果,并与GenBank数据库中CRISP2基因序列进行比对,以及SNP数据库进行比较分析,找出突变位点。结果：应用PCR技术对构建的男性精子DNA样本池进行扩增,成功获得了CRISP2基因全部外显子及其与内含子的邻接区域序列的10个基因片段,以及上游5’调控序列的3个基因片段。初步测序共获得了8个双峰杂合子位点(rs699957G/T、rs515257A/G、rs2248263A/G、rs12624G/T、rs360543C/G、 rs360542C/T、rs517705C/T和rs699958A/G),其中2个SNPs位点rs360542C/T和rs517705C/T尚未见中国人群的相关报道。对筛查出的SNPs位点进一步分析,一些SNPs在弱精子症组与正常精液对照组测序图中等位基因的峰高比值不同,为差异SNPs位点。外显子上的两个差异SNPs (rs699957G/T、rs12624G/T)均位于非编码区,不引起氨基酸序列的变异,筛查结果尚未发现其他导致氨基酸突变的SNPs。结论：经过对广西男性精液样本的多态性初步分析,发现CRISP2基因共出现了8个SNP多态位点,其中rs517705C/T、rs699957G/T和rs515257A/G位点在弱精子症组和正常精液组等位基因峰值明显不同,据此推测CRISP2基因的多态性可能与广西弱精子症发生有一定的关联。