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目的:观察高表达rTCS对宫颈癌Caski细胞增殖和细胞周期,及甲基化转移酶I (DNA methyltransferase,DNMT1)的表达和抑癌基因p73启动子区甲基化状态的影响。探索高表达rTCS是否能抑制Caski细胞生长,是否具有去甲基化作用,能否诱导p73基因重新表达,从而为rTCS抗宫颈癌药效及机制研究提供理论依据。方法:(1)限制性内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳切胶回收、T4连接酶连接等方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/6xHis-TCS。(2)反转录PCR(RT-PCR)、实时定量PCR(FQ-PCR)、蛋白免疫印记(Western-blot)筛选高表达rTCS的Caski细胞株,及检测DNMT1和p73的表达情况。(3)MTT还原测定法比较分析细胞生长情况。(4)FCM用于分析细胞周期变化。(5)甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR, MSP)法检测p73基因5ˊ端启动子区CpG岛甲基化状态的改变。结果:(1)成功构建rTCS真核表达质粒pcDNA 3.1(-)/6xHis-TCS,将此质粒转染Caski细胞株,经G418筛选,RT-PCR和Western-blot鉴定,获得高表达rTCS的Caski细胞株。(2)高表达rTCS的Caski细胞(实验组)增殖速度明显低于对照组,二者在24h、48h、72h均具有显著性统计学差异(p<0.01);FCM结果显示:实验组细胞G1期和G2期细胞数比例高于对照组(p<0.5),而S期较对照组低(p<0.01),差异具有统计学意义。(3)实验组细胞DNMT1在mRNA及蛋白水平的表达均低于对照组,其中mRNA水平降低0.56倍(p<0.01)。(4)实验组细胞p73基因启动子甲基化程度比对照组细胞有所降低,而p73mRNA表达水平高于对照细胞。结论:(1)rTCS高表达能够显著抑制Caski细胞增殖并能将细胞抑制在G1和G2期,且随时间延长,抑制程度增加。(2)高表达rTCS能够显著抑制Caski细胞中DNMT1mRNA及蛋白水平的表达。(3)高表达rTCS能够逆转Caski细胞中p73基因的甲基化状态,从而诱导其重新表达。(4)在Caski细胞中高表达的rTCS可能通过抑制DNMT1的表达,导致p73抑癌基因启动子去甲基化而重新表达,从而抑制宫颈癌Caski细胞增殖。