赤拟谷盗热激蛋白70基因的竞争定量PCR系统的构建

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dsfgsdfwe
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
利用RT-PCR技术构建了赤拟谷盗(Tribolium castaneum)热激蛋白70基因的竞争定量PCR系统.竞争性对照模板的构建方法是:利用计算机辅助优选设计引物,在合适的退火温度下,得到单一的特异性强的赤拟谷盗的热激蛋白70靶标基因的条带,而后降低退火温度,从几条非靶标的条带中选择一条,后经胶回收纯化、连接、转化,最后得到纯的质粒。此质粒就是在赤拟谷盗的竞争定量PCR系统中的竞争性对照模板,它与赤拟谷盗的热激蛋白70靶标基因的两端都含有PCR引物DNA序列,但是它们的PCR产物的分子量不同,并且能通过琼脂糖凝胶电泳区分开来。在竞争PCR中,利用系列浓度稀释后的竞争性对照模板与靶标DNA在同一试管中反应,由于它们互相竞争PCR引物的结果,靶标PCR产物和竞争性对照模板PCR产物的量呈线性相关。利用光密度分析仪得到竞争性对照模板PCR产物和靶标PCR产物的相对量,并可以得到它们之间的比值。由它们之间的比值,我们绘制了竞争性对照模板的初始浓度与竞争性对照模板PCR产物和靶标PCR产物比值之间的标准曲线,并得到它们之间的线性方程为Y=1.032X-1.618,其中相关系数r2=0.975。 本研究利用降低退火温度的方法得到了对赤拟谷盗热激蛋白70基因进行竞争PCR定量的内部竞争物,通过内部竞争物和目的基因共同竞争底物和引物,得到它们的PCR产物的比值,绘制它的标准曲线,建立了它的竞争定量PCR系统,为它的热激蛋白70基因定量提供了方便,并为研究热激蛋白在转录水平上的表达规律奠定了基础。同时,为在昆虫中构建竞争定量PCR系统的理论提供了依据。
其他文献
油菜菌核病是一种世界性的真菌病害,严重影响着油菜生产,具有土传和气传病害的特点,其病原为Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary。本试验通过对生防放线菌苦胆链霉菌St
该文针对由肿囊腐霉(Pythium inflatum)引起的玉米茎基腐病,从玉米植株分离筛选出具有诱导抗性的内生细菌菌株;并对该菌株的诱导抗性机理及在玉米植株体内系统定殖规律进行了
该研究探索应用核酶策略来防治番茄上这两种病毒病.选择CMV和ToMV广东分离物的复制酶RNA作为核酶作用的靶分子,分别设计锤头型核酶.根据GenBank中已经报道的株系的序列,利用R
烟草蚜传病毒病是烟草的重要病害.该文通过田间调查和室内研究相结合,明确山东烟区烟草蚜传病毒病的流行规律以及田间蚜虫与病毒病的关系,明确感染CMV、PVY的烟株对烟蚜种群
本文研究了冷杉针叶提取物对小麦、番茄种子萌发的影响及其对苹果腐烂病菌等植物病原真菌的抑制作用;通过田间药效试验,评价了10%冷杉针叶提取物水乳剂对小麦、番茄的促生长作
白背飞虱(Sogatella furcifera),是我国水稻生产上重要的迁飞性害虫之一。白背飞虱的成虫、若虫直接刺吸稻株的韧皮部汁液,影响水稻光合作用和呼吸作用,并且传播病毒,严重影
本刊讯4月10日,我校在大力推进丝绸之路智能远程教育基础上,进一步拓展成立了丝绸之路教科文研究院(中心)。
本研究以栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)为实验材料,进行栗疫病菌及其dsRNA的群体多样性研究。 采用生物学测定和凝胶电泳对栗疫病菌的dsRNA进行研究。根据电泳图谱,中
采用通用的VRML生成器和QuickTime播放器,基于Internet国际互联网环境,通过对国际现有的VRML生成器性能的对比,应用VRML语言,构造出一个虚拟的境界。虚拟博物馆自动生成系统
该论文的研究内容包括:(1)对21个豇豆品种的苗期抗锈生进行了鉴定,并对鉴定技术进行了研究;(2)对5个不同梯度抗性的豇豆品种与锈菌互作中的8种相关酶(苯丙氨酸解氨酶(PAL)、