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Stat5a在不同类型的细胞和组织中广泛表达,是调控女性生殖系统如乳腺等发育的最重要的转录因子之一,影响细胞生长、增殖、分化、凋亡,是细胞内重要的信号转导通路,其异常表达或变异与人类生殖系统癌症如乳腺癌、前列腺癌等有一定的关系。?5 Stat5a是从人乳腺癌细胞发现,由转录后FL Stat5a hn RNA选择性剪接生成的变体,缺失了位于N-末端的与第5号外显子对应的30个氨基酸。我们推测,其结构变异可能引起其信号转导通路的改变,从而导致乳腺上皮细胞生物学特性的改变。该变体的发现和研究对进一步认识人类乳腺癌发病的分子机理和临床治疗有非常重要的价值。本研究通过构建分别携带FL Stat5a和?5 Stat5a c DNA的p LVX-FL和p LVX-Δ5慢病毒表达载体,以p LVX-Ac GFP1-N1空载体作为对照,分别转染人胚肾HEK293T细胞,包装获得高滴度有活性的病毒,然后以此病毒感染人乳腺癌细胞(MCF-7),经嘌呤霉素筛选获得MCF7-Con、MCF7-FL和MCF7-Δ5稳转细胞株。分别培养上述三种稳转细胞,提取其总RNA,然后以Illumina Hi Seq TM 2500高通量测序平台对s RNA进行深度测序。统计各样品中人源的2588种mi RNA的表达量并计算校正表达值(RPM值),比较每两组样品之间的mi RNA表达的差异性,对样品中的新mi RNA进行预测和二级结构及序列分析,探讨过表达FL Stat5a和Δ5 Stat5a对人乳腺癌细胞mi RNA表达的影响。测序统计分析表明,过表达FL Stat5a和Δ5 Stat5a使s RNA表达谱及其丰度发生改变,相对于MCF7-Con细胞,表达水平变化较大的s RNA主要位于1、3、6、7、11、12号染色体,其他染色体s RNA表达水平变化较小;MCF7-Con、MCF7-FL和MCF7-Δ5中分别有595、506和526种mi RNA表达,且60%以上的mi RNA表达量在1~100之间;21个仅在MCF7-Δ5中表达,17个在MCF7-Δ5中不表达,但在MCF7-Con及MCF7-FL有表达;11个在MCF7-FL中表达,17个在MCF7-FL中不表达,但在MCF7-Con及MCF7-Δ5表达;相对于MCF7-Con,MCF7-FL稳转细胞中298个mi RNA表达具有差异(19个为一般显著性差异,5个表达上调,14个表达下调,31个为极显著性差异,11个表达上调,20个表达下调),相对于MCF7-Con,MCF7-Δ5中324个mi RNA表达具有差异(22个为一般显著性差异,6个表达上调,16个表达下调,28个为极显著差异,7个表达上调,21个表达下调),相对于MCF7-FL,MCF7-Δ5中有106个mi RNA表达具有差异(4个为一般显著性差异,均为表达下调,99个为极显著差异,50个表达上调,49个表达下调);分别预测到110、91、105种可能的mi RNA,其中分别有27、27和25种位于基因组的基因间区且具有已知mi RNA的类似结构。FL Stat5a和?5 Stat5a过表达可显著影响细胞mi RNA的表达,二者之间存在显著性差异;在MCF7-Δ5细胞不表达,但在MCF7-Con及MCF7-FL有表达的17种mi RNA需要进一步深入研究,特别是hsa-mi R-873-3p和hsa-mi R-216b-5p(与MCF7-Con组具有显著性差异);hsa-mi R-873-3p、mi R-486-5p、mi R-338-5p(表达量三组样品中两两具有显著性差异)将是我们下一步的研究重点;过表达Δ5Stat5a抑制hsa-mi R-199a-3p、hsa-mi R-335-5p、hsa-mi R-335-3p、hsa-mi R-429等53个mi RNA表达,促进hsa-mi R-218-5p、hsa-mi R-34a-3p、hsa-mi R-155-5p等50个mi RNA表达,说明Δ5 Stat5a可能通过调节这些mi RNA的表达而实现促进乳腺癌细胞增殖、迁移,反之,mi RNA的表达变化也可以反向调节Δ5 Stat5a的表达。本研究对进一步研究Δ5 Stat5a在乳腺癌发生与发展中的分子机理有重要意义,已有确切证据表明hsa-mi R-199a-3p、hsa-mi R-335-5p、hsa-mi R-218-5p、hsa-mi R-34a-3p等mi RNA在乳腺癌的发生或治疗中发挥作用,hsa-mi R-3922-5p、hsa-mi R-5585-3p、hsa-mi R-6784-3p、hsa-mi R-659-5p、hsa-mi R-1261等多种mi RNA与乳腺癌的关系尚未研究清楚,与Δ5 Stat5a的靶向关系也有待更进一步研究。