论文部分内容阅读
黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的具有致畸致癌作用的次级代谢产物，它能污染许多农作物并引起全世界的食品和饲料安全问题，造成巨大的经济损失。自然界中存在着不产毒的黄曲霉菌和寄生曲霉菌，有研究表明不产毒黄曲霉菌和寄生曲霉能够有效的抑制产毒黄曲霉菌的产毒。本实验室从四个生态区(辽宁、山东、湖北和广东省)分离鉴定到一批不产毒黄曲霉菌，通过常规PCR鉴定不产毒黄曲霉菌其毒素合成路径上29个基因的缺失情况，以及用Real-timePCR检测毒素合成基因都存在的不产毒菌中关键基因的表达情况，来阐述黄曲霉菌不产毒的分子机制，然后分析了不产毒黄曲霉菌对产毒菌产毒的抑制效果，这为控制田间黄曲霉毒的污染提供了一定的技术支持。主要结论如下：1、在从全国4大花生生态区分离到的323株候选黄曲霉菌株中，鉴定出76株不产毒黄曲霉菌，并发现不产毒黄曲霉菌的发生概率随着纬度升高、温度降低而增加。2、利用常规PCR对76株不产毒黄曲霉菌其毒素合成基因进行检测，共鉴定到25种（A-Y）缺失类型，其中有34株菌是有基因缺失的，占整个不产毒菌的44.74%，说明基因缺失是造成黄曲霉不产毒的重要原因之一。四个省份中基因缺失类型最多的省份是湖北省，有22种基因缺失类型，这说明湖北省的基因缺失多样性是最多的，这可能是跟地理位置和气候有关。3、建立了一种快速检测不产毒黄曲霉菌的方法。利用基因aflT、nor-1、aflR和hypB鉴定不产毒菌，具体判断标准为：当DNA条带数为0-3时，表明该待测菌是不产毒；当DNA条带数为4时，表明该待测菌极有可能是产毒黄曲霉菌，需要进行进一步的测定。4、利用Real-time PCR检测42株不产毒黄曲霉菌（毒素合成基因都存在）中6个关键毒素合成基因的表达水平，结果显示其中有2个基因（aflR和nor-1）的表达下调率为100%，推测这42株不产毒菌不产毒的原因可能与这2个基因表达量的显著下调密切相关。5、从10株有大片段基因缺失的不产毒黄曲霉菌中初筛选出6株能能显著抑制产毒菌GZ-1产毒的不产毒黄曲霉菌，分别为AF-1、AF-2、AF-3、AF-4、AF-5和AF-6。在花生和玉米两种培养基上，对产毒菌GZ-1（菌核类型L型）产毒抑制效果最好的是AF-4，它能抑制75.94%以上的产毒量。而对HB-1（菌核类型S型）产毒抑制效果最好的菌株是AF-6，它能抑制97.79%以上的产毒量。不论在花生培养基上还是玉米培养基上，不产毒黄曲霉菌对产毒菌HB-1产毒的抑制效果明显高于对产毒菌GZ-1产毒的抑制效果，有些不产毒菌能够完全抑制产毒菌HB-1的产毒。