论文部分内容阅读
中药的疗效依赖于化学成分的复杂性和活性成分的协同作用。但中药含有的化学成分易受产地环境因素影响,导致其品质存在差异。中药色谱指纹图谱是综合、可量化的鉴别评价手段,广泛应用于中药产地鉴别和质量评价等方面。该技术能较全面的反映特征性化学成分组成和含量的整体状况,结合多种指标成分的化学信息分析,实现对中药质量的整体控制和多指标控制。本论文以云南传统道地药材滇龙胆(Gentiana rigescens Franch.)为研究对象,采用高效液相色谱法,建立滇龙胆色谱指纹图谱,测定活性成分含量,结合化学计量学方法对不同产地和海拔梯度的滇龙胆进行质量评价研究,以期为滇龙胆资源的合理开发利用和质量控制提供理论依据,同时为滇龙胆的道地性研究提供参考。论文分为五个章节,第一章建立和分析滇西北滇龙胆的高效液相色谱指纹图谱;第二章测定不同产地滇龙胆中4种指标成分含量,结合灰色关联度分析(Grey Correlation Analysis,GRA)法进行质量评价;第三章分析滇西北、滇中和滇东南地区滇龙胆的品质差异;第四章对不同海拔地区滇龙胆质量进行分析,探讨其品质与海拔梯度间的联系;第五章为文献综述,总结了中药色谱指纹图谱在中药质量评价中的研究现状。采用高效液相色谱法建立滇西北少数民族聚居地区滇龙胆样品指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)》确定共有峰,计算共有峰相对保留时间和相对峰面积,进行相似度分析,并采用SPSS22.0软件进行聚类分析。结果显示,滇龙胆样品指纹图谱共确定17个共有峰,图谱相似度大于0.9,10批样品聚为两类,发现各批次样品成分类型基本一致,但成分含量存在差异。检测出5种主要成分马钱苷酸、獐芽菜苷、龙胆苦苷、当药苷和异牡荆苷的含量,其中各批次样品龙胆苦苷含量均符合《中国药典》2015年版的要求。采用高效液相色谱法分析云南10个不同地区的50株滇龙胆,测定主要药效成分马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和当药苷的含量。基于GRA法处理样品各指标成分数据,计算各评价单元序列相对于参考序列的相对关联度作为测度,对样品进行综合评价。结果显示,滇龙胆样品的相对关联度ri在0.306~0.600,其中14个样品ri大于0.500,23个样品ri小于0.400,表明样品质量间差异较大。大理鹤庆的DH3和DH5的ri分别为0.600和0.576,质量最优。不同地区样品ri的平均值在0.325~0.541,鹤庆样品ri的平均值最大,质量总体水平最高,可作为优质种源进一步研究和推广。各地区样品ri的RSD在4.4%~11.9%,昆明寻甸样品ri的RSD最小,样品最为稳定。采用高效液相色谱法分析滇中、滇西北和滇东南12个县的滇龙胆,测定活性成分马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和当药苷的含量,结合主成分分析和偏最小二乘判别分析,进行产地鉴别和质量评价。结果显示,不同产地样品中龙胆苦苷(3.431%~7.126%)含量最高,马钱苷酸(0.367%~1.729%)含量较低,獐牙菜苦苷(0.032%~0.208%)和当药苷(0.028%~0.193%)的含量较为接近。主成分分析结果显示,红河建水DDN2(F=1.2634)、怒江兰坪DXB20(F=1.2569)和DXB18(F=1.2507)的主成分综合得分最高,滇西北、滇中和滇东南分别有15、11和4个样品在总体排名前30名,表明滇西北和滇中的滇龙胆品质较优。偏最小二乘判别分析结果表明,以指纹图谱的色谱峰面积数据为变量进行分析,能较好地区分滇西北、滇中和滇东南地区样品。采用高效液相色谱法建立11个不同海拔地区滇龙胆指纹图谱,进行相似度分析,对4种活性成分马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和当药苷进行定量分析,结合偏最小二乘判别分析和聚类分析研究滇龙胆质量与海拔梯度间的联系。结果显示,大部分样品图谱相似度大于0.960,不同海拔样品化学成分组成相似;各活性成分的含量在不同海拔存在差异。偏最小二乘判别分析和聚类分析的结果表明,采自海拔1620~2218 m和2360~2879 m的样品具有较大差异,滇龙胆品质受产地海拔的影响。