’滁菊’(Chrysanthemum morifolium(Ramat.)Tzvel.’Chuju’)是菊科菊属多年生的草本植物。因其独特而良好的养生及药用功效,名列中国四大药菊之首,还是安徽省“四大”著名药材之首。近年来,’滁菊’在我国的栽培面积逐步扩大,但由于在数百年的栽培过程中,长期营养繁殖导致其病毒感染较严重,出现种质退化,花变异发红,花朵品质变差等现象,严重阻碍和制约了’滁菊’产业化的发展。本文从’滁菊,的病毒检测开始,确定感染病毒种类,比较了 3种主要脱毒方法对’滁菊,病毒脱除的效果,并对脱毒植株的遗传稳定性和叶片活性成分含量进行了评价,建立了 ’滁菊,病毒检测和高效脱毒的技术体系,为’滁菊’脱毒苗的推广和应用提供了有力的理论依据。主要研究结果如下:1.以田间表现出症状,疑似感染病毒的’滁菊,为材料,通过电镜检测和巢式RT-PCR两种方法检测侵染’滁菊’的主要病毒,最终病毒检测结果表明:侵染’滁菊,的主要病毒为菊花B病毒(CVB)和菊花矮化类病毒(CSVd);建立了以巢式RT-PCR为基础,以CVB病毒的5’序列反向引物为特异引物进行反转录得到特异cDNA的高灵敏度检测菊花B病毒体系,其灵敏度高达10-9,有效地解决了现有病毒检测技术中对菊花B病毒的检测灵敏度不高,易出现假阳性等问题,为田间早期的菊花病毒病防控提供了有效的帮助。2.进一步通过茎尖分生组织培养、热处理结合茎尖分生组织培养及化学试剂病毒唑结合茎尖分生组织培养3种脱毒方法对’滁菊’病毒进行脱除,比较了 3种脱毒方法的’滁菊’茎尖存活率和脱毒效果。结果表明:一次茎尖分生组织培养的存活率最高,为78.78%;病毒唑添加浓度为10 mg/mL时茎尖存活率较高;热处理结合茎尖分生组织培养和化学试剂结合茎尖分生组织培养脱毒效果较单独采用茎尖分生组织培养的脱毒效果好。3.在DNA水平上,利用12对SRAP引物组合对3种不同脱毒方法获得的脱毒苗以及常规无菌组培苗进行遗传稳定性分子检测,结果表明3种不同脱毒方法获得的脱毒苗与常规无菌苗之间未检测到遗传位点的明显差异,表明了脱毒处理及再生培养没有对’滁菊’产生了遗传变异影响,3种脱毒方法获得的脱毒苗均能有效地保持’滁菊’的遗传稳定性;利用液相色谱检测比较了 3种不同脱毒方法的脱毒苗及无菌苗、大田苗叶片中总黄酮、绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A的含量,结果表明脱毒苗与常规无菌苗、大田苗之间有明显差异,热处理结合茎尖分生组织培养的脱毒苗与大田苗差异极显著,分别比大田苗增加了1.93,4.46,2.02,14.58倍。