前言 动物肿瘤的发生原因，从根本上说是由于某种细胞周期的失控，使之不能正常运转，引起增殖分化异常，最终导致癌变。 细胞周期蛋白D1(简称Cyclin D1)是一种作用于G1期的细胞周期相关蛋白，与多种蛋白相互作用促进细胞进入S期。它是一种原癌基因，在多种肿瘤中均有其扩增和／或表达增强。 p27蛋白是与Cyclin D1相对应的、与多种肿瘤发生关系密切的抑癌基因，它作为细胞周期负性调控因子，具有阻止细胞通过G1／S期转换的作用，从而抑制肿瘤细胞增殖。 Cyclin D1和p27蛋白在多种肿瘤中的表达与其生物学行为密切相关，即在恶性肿瘤中Cyclin D1蛋白高表达，p27蛋白则表达下调或缺失。但在外阴癌变中的表达及作用的研究，国内未见相关报道。 外阴鳞癌约占女性生殖器恶性肿瘤的3～5％，占妇女全身肿瘤的1％～2％，近年来发病率趋于平稳，而外阴上皮内瘤样病变(VIN)的发病率逐年升高，外阴非瘤性上皮内病变(NNED)过去传统上认为是一种癌前病变，目前仅流行病学研究发现其有恶变倾向，但从分子病理学角度研究其是否有恶变倾向较少。 本研究采用免疫组化方法研究Cyclin D1与p27基因在外阴鳞癌、外阴上皮内瘤样病变、外阴非瘤性上皮内病变及正常外阴皮肤中的表达，探讨它们与外阴癌变之间的关系。 实验材料与方法 1 实验对象 收集1994年1月至2003年6月在中国医科大学附属第一医院住院或门诊就诊的经病理证实的①外阴鳞癌患者的癌组织标本20例，平均年龄54.9岁(33-72岁)；②外阴非瘤性上皮内病变标本40例，其中鳞状上皮细胞增生20例，平均年龄47.6岁(29-73岁)，硬化性苔藓20例，平均年龄57.7岁(24一80岁);③外阴上皮内瘤样病变(viN)病例30例，其中viN1 10例，平均年龄34.9岁(19一53岁)，VIN 11 10例，平均年龄41.7岁(30一63岁)，VIN 11110例，平均年龄47 .8岁(25一70岁);④对照组取正常外阴皮肤5例，平均年龄45.6岁(31一60岁)。 2实验方法 2.1标本常规经福尔马林固定、石蜡包埋、制成4林m切片、HE染色。 2.2免疫组织化学方法(SP法) 标本切片后常规脱蜡，含10%过氧化氢的甲醇溶液中浸泡10分钟，蒸馏水洗3次，每次3分钟。热抗原修复，正常羊血清封闭20分钟，甩去多余液体。滴加50协l一抗(即用型鼠抗人Cyelin DI，或即用型鼠抗人p27抗体，购自福建迈新生物技术有限公司)，于室温下孵育1 .5小时，PBS液洗3次，每次5分钟。加人50闪生物素标记的二抗(1:100生物素标记的羊抗鼠I娇，购自福建迈新生物技术有限公司)，于室温下孵育10分钟，PBS液洗3次，每次3分钟。加人50闪SP复合物于室温下孵育20分钟，PBS液洗4次，每次5分钟。DAB显色，常温下2一8分钟，在显微镜下观察控制显色时间。自来水终止显色，约5分钟。苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS液代替一抗作阴性对照。 2.3结果判断 cychn Dl和p27蛋白表达定位在细胞核中，出现棕黄色颗粒为阳性。每个标本随机观察5个高倍视野，计数100个细胞中阳性细胞的比值，取其平均值。 2 .4统计学处理 各组间比较、不同临床分期、组织细胞分化程度、组织类型CycllnDI、p27蛋白表达比较用xZ(Chi一S，are)检验，统计学处理软件sAS system 6.11版。结果1细胞分化与年龄的关系外阴鳞癌无论年龄大小均以高分化为主60%(12/20)。.2夕7和Cyclin Dl蛋白在各组间表达的阳性率醉7蛋白在正常外阴皮肤中100%为阳性表达(5乃)，在外阴非瘤性上皮内病变、外阴上皮内瘤样病变和外阴鳞癌中的阳性病例数分别为87 .5%(35辫O)、53 .3%(25乃。)和40.0%(8/20)。正常外阴皮肤中P27蛋白的阳性率高于外阴上皮内瘤样病变和外阴非瘤性上皮内病变组，但无显著性差异(P>0.05);而在外阴鳞癌与正常对照、外阴非瘤性上皮内病变、外阴上皮内瘤样病变组间均有显著性差异(P<0.01)。 CyclinDI蛋白在正常外阴皮肤、外阴非瘤性上皮内病变、外阴上皮内瘤样病变和外阴鳞癌组中阳性病例数分别为0%(O乃)、35.0%(14/40)，43 .3%(13乃。)和65 .0%(13/20)。eyelin DI蛋白在正常对照与外阴鳞癌、外阴非瘤性上皮内病变和外阴上皮内瘤样病变之间比较均有显著性差异(P<0.01)，外阴鳞癌与外阴非瘤性上皮内病变和外阴上皮内瘤样病变间也有显著性差异(P<0.05)，但外阴非瘤性上皮内病变和外阴上皮内瘤样病变组间无显著性差异(P>0.05)。 3 p27和cychn Dl蛋白在各组中细胞阳性指数的比较 p27蛋白在正常外阴皮肤、外阴非瘤性上皮内病变、外阴上皮内瘤样病变和外阴鳞癌中的细胞阳性指数分别为97.5%、73.65%、66.27%和n.9%。外阴鳞癌组与外阴正常皮肤、外阴非瘤性上皮内病变、外阴上皮内瘤样病变组间均有显著性差异(P<0.01);而其它三组间无显著性差异(P>0 .05)。 CyclinDI蛋白在正常外阴皮肤、外阴非瘤性上皮内病变、外阴上皮内瘤样病变和外阴鳞癌中细胞阳性指数的表达分别为0%、23 .65%、17.23%和54.6%;cychn Dl蛋白在外阴鳞癌组与外阴正常皮肤、外阴非瘤性上皮内病变和外