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越橘(Vaccinium)种质资源种类繁多，分布范围广，其中部分种类如蓝莓、大果蔓越橘和红豆越橘的果实营养丰富、花青素含量高而受到关注，现已成为重要的小浆果果树。种质资源流失速度的加快和保存成本的增高，如何采用新的技术更加低成本和高效地保存种质资源是各国共同面临的难题。由于超低温保存技术具有操作相对简便、不易产生变异和可长期保存等优点，成为了种质保存的理想方案。本试验以越橘组培苗为试材，对包埋玻璃化超低温保存中海藻酸钠浓度、预培养基蔗糖浓度与处理时间、加载时间、玻璃化保护液处理时间和卸载时间等多个因素进行优化，并进行了多个基因型验证、液氮长期保存验证和冷冻保存后再生植株遗传稳定性鉴定研究，旨在为越橘种质资源保存建立高效、广谱的尖包埋玻璃化超低温保存体系。试验获得以下主要结果：
1、形成了如下优化体系：从30d苗龄‘密斯梯’组培苗截取带顶芽茎段(0.5cm)，剥取茎尖(长1.5-2.0mm，4-5片叶原基)在预培养基(WPM+0.3M蔗糖+7g/L琼脂)上培养1d(25℃±2℃，黑暗)；用移液枪(枪头口径约1.5mm)吸取海藻酸钠溶液(WPM+2%海藻酸钠+2.0mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖)和茎尖，滴入氯化钙溶液(WPM+0.1MCaCl2+2.0mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖)中，静置30min(室温)形成直径约4mm包埋球(每球1个茎尖)；将包埋球移入20ml加载液(WPM+2.0mol/L甘油+1.0mol/L蔗糖，φ90mm玻璃培养皿)中，培养皿无菌密封后放在摇床上处理1.5h(70r/min，室温)；包埋球移入20mlPVS2(WPM+30％甘油+15％乙二醇+15％DMSO+0.4mol/L蔗糖，0℃冰水浴)中，培养皿无菌密封后放在摇床上处理4h(70r/min，0℃)；将包埋球转入2ml冷冻管中(每支管10粒小球)，并填加1.5ml新的PVS2后封盖；迅速液氮保存；取出冷冻管37℃水浴解冻1-2min；包埋球移入20ml卸载液(WPM+1.2M蔗糖)处理20min(室温)；在无菌滤纸上剥离出包埋球中茎尖，随即接入培养基(WPM+0.3mg/LZT+7g/L琼脂+30g/L蔗糖)，培养5d(黑暗，25℃±2℃)后转至正常培养条件(25℃±2℃，50μmol/s·m2白色荧光灯，光照16h/d)再生培养。液氮保存90d没有影响茎尖再生率。
2、通过越橘8个基因型的验证，超低温保存后的茎尖平均再生率为58%，最高和最低再生率分别为78.5%和41.7%。75%的试验品种再生率达到或超过50％。该技术体系具有广谱性好、效率高的特点。
3、运用ISSR分子标记检测了超低温保存后的‘密斯梯’再生植株，未发现有变异条带。
1、形成了如下优化体系：从30d苗龄‘密斯梯’组培苗截取带顶芽茎段(0.5cm)，剥取茎尖(长1.5-2.0mm，4-5片叶原基)在预培养基(WPM+0.3M蔗糖+7g/L琼脂)上培养1d(25℃±2℃，黑暗)；用移液枪(枪头口径约1.5mm)吸取海藻酸钠溶液(WPM+2%海藻酸钠+2.0mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖)和茎尖，滴入氯化钙溶液(WPM+0.1MCaCl2+2.0mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖)中，静置30min(室温)形成直径约4mm包埋球(每球1个茎尖)；将包埋球移入20ml加载液(WPM+2.0mol/L甘油+1.0mol/L蔗糖，φ90mm玻璃培养皿)中，培养皿无菌密封后放在摇床上处理1.5h(70r/min，室温)；包埋球移入20mlPVS2(WPM+30％甘油+15％乙二醇+15％DMSO+0.4mol/L蔗糖，0℃冰水浴)中，培养皿无菌密封后放在摇床上处理4h(70r/min，0℃)；将包埋球转入2ml冷冻管中(每支管10粒小球)，并填加1.5ml新的PVS2后封盖；迅速液氮保存；取出冷冻管37℃水浴解冻1-2min；包埋球移入20ml卸载液(WPM+1.2M蔗糖)处理20min(室温)；在无菌滤纸上剥离出包埋球中茎尖，随即接入培养基(WPM+0.3mg/LZT+7g/L琼脂+30g/L蔗糖)，培养5d(黑暗，25℃±2℃)后转至正常培养条件(25℃±2℃，50μmol/s·m2白色荧光灯，光照16h/d)再生培养。液氮保存90d没有影响茎尖再生率。
2、通过越橘8个基因型的验证，超低温保存后的茎尖平均再生率为58%，最高和最低再生率分别为78.5%和41.7%。75%的试验品种再生率达到或超过50％。该技术体系具有广谱性好、效率高的特点。
3、运用ISSR分子标记检测了超低温保存后的‘密斯梯’再生植株，未发现有变异条带。