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目的在我国,肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是仅次于肺癌的最常见的原发性恶性肿瘤,也是肿瘤导致的相关死亡的主要原因之一。统计分析显示,中国每年新增肝癌病例估计有340000例,占世界上肝癌病例的55%。此外,尽管治疗手段在过去几十年中取得了较大改善,如手术切除、化疗、肝移植等联合应用,但肝细胞癌患者的预后仍然很差。肝细胞癌是一种由多个基因和多种环境因素引起的复杂疾病,病理学研究已经确定了一些引起肝癌发生的风险因素,包括接触黄曲霉毒素、酒精滥用、减少抗氧化微量营养素的摄入、乙型肝炎病毒感染。近些年,很多报告表明,基因多态性在肝癌的发展和预后中扮演重要角色。研究发现,miRNAs表达在各种疾病的发生发展过程中行使重要功能。而RAN、HIWI和Dicer三个基因在miRNAs成熟过程中发挥决定性的作用。所以本研究拟结合临床和基础研究,探索RAN、HIWI和Dicer三个基因多态性与肝癌患者易感性及预后之间的相关性。微小RNA(Micro RNAs,miRNAs)具有基因表达调控功能,在肝细胞癌(HCC)的发病机制及预后中扮演着重要的角色。miRNA加工基因的遗传变异可能影响miRNAs的表达,导致肝癌的发生和生存风险的变化。所以我们推测miRNA加工基因的单核苷酸多态性(SNP)可能与肝癌易感性和预后有关,以及miRNA加工基因Dicer的表达改变也对肝癌的发生发展有影响。方法首先,我们采用Taq Man assay的方法对312名肝癌患者和320名正常对照的miRNA加工基因的三种SNPs(RAN rs3803012 A>G,HIWI rs10773771 T>C,和DICER rs1057035 T>C)进行基因分型,评估这三种SNPs和肝癌风险关系。然后,我们通过结合实验结果和临床随访资料,研究了这三种SNPs对312名肝癌患者预后的影响。其次,我们采用western blot方法分别对11例肝癌组织、11例正常肝脏组织、2种肝脏细胞(HL7702和L-02)、4种肝癌细胞(LM3、Hep G2、Hep3B和MHCC97H)内Dicer蛋白的表达情况进行检测。另外,我们使用过表达载体pc DNA3.1-DICER转染肝癌细胞系MHCC97H后,分别使用western blot,MTT,流式细胞术及transwell方法对MHCC97H细胞内Dicer表达情况以及MHCC97H细胞的增殖能力、凋亡情况、侵袭能力进行鉴定。结果三种SNPs(RAN rs3803012 A>G,HIWI rs10773771 T>C,和DICER rs1057035 T>C)和肝癌风险间没有明显相关性(p<0.01)。但是,携带DICER rs1057035 CT+CC基因型的肝癌患者与rs1057035 TT基因型的肝癌患者相比,有明显较长的中位生存时间(秩和检验P=0.018)和明显减少的死亡率(校正HR=0.68,95%CI:0.49-0.95,P=0.022)。这些效果在年龄小于60岁,吸烟,B阶段,女性,经过化学或干预疗法的患者中更明显(HR=0.48,0.60,0.69,0.46,0.67,所有p<0.05)。Dicer蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达均低于正常肝脏组织和肝脏细胞。且转染重组质粒pc DNA3.1-DICER使肝癌细胞MHCC97H中Dicer水平明显提高,同时降低了MHCC97H细胞的增殖能力和侵袭能力,促进了MHCC97H细胞凋亡。结论本研究表明DICER rs1057035 T>C多态性可能成为肝癌患者预后的生物标志物,另外,Dicer也有可能成为肝癌患者分子治疗的新靶标。