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本试验以‘大五星’枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.cv.Da Wu Xing)试管苗和叶片愈伤组织为材料,采用不同浓度的EMS和不同处理时间进行化学诱变,并对诱变处理后试管苗进行形态、同工酶和RAPD分析,旨在获得突变体,为丰富我国枇杷育种新材料奠定一定的理论和技术基础。主要结果如下: 1 将愈伤组织转入到含0.1%~0.9%EMS的培养基中处理3天,愈伤组织的死亡率很低。在EMS浓度为0.1%~0.9%,诱变时间0.5h~1.5h的范围内,试管苗的死亡率也很低。 2 在对试管苗诱变处理中,EMS浓度和处理时间对试管苗生长有明显影响。当EMS浓度为0.1%,诱变时间为0.5h时,得到的试管苗平均株高达到3.23cm,平均叶长与平均叶宽的乘积为3.76cm2,平均叶绿素含量为4.21mg.g-1,均明显高于对照。当EMS浓度为0.5%,处理时间为0.5h时平均增殖系数最大,达4.50;0.1%、0.5h的EMS处理,对植株平均株高、叶面积、平均叶绿素含量有一定的促进作用,但随着EMS浓度的进一步增大,诱变时间的进一步延长,试管苗的平均株高、叶面积有下降的趋势,并且叶色有由浓绿→绿→黄绿变化的趋势,叶片逐渐变得狭长。 3 EMS处理后,试管苗中出现了一定比例表型变异的单株,总变异率约为18.5%,各处理变异范围在8.3%~33.3%之间,当EMS处理浓度为0.9%时变异频率最高,达30%以上。 4 从EMS处理后表型变异的单株中检测到了过氧化物酶酶谱发生变化的试管苗。从文中酶谱图来看,在0.1%EMS处理0.5h、0.3%EMS处理0.5h和1.0h中各有1株试管苗过氧化物酶酶谱较对照在Rf值为0.2959处多了一条酶带4;在0.9%EMS处理1.5h中检测到1株试管苗过氧化物酶酶谱也发生了变化,与对照相比缺少一条Rf值为0.0723的酶带2。 5 在PCR扩增体系中,采用25μl的反应体系,包括Taq酶(5U.μl-1) 0.25μl,10×PCR buffer(Mg2+ free) 2.5μl,MgCl2(25mM) 2.0μl,dNTP mixture(2.5mM each) 2.0μl,引物(10μM) 2.0μl、模板1.0μl和ddH2O 15.25μl;反应程序94℃预变性5min,94℃变性1min,38℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环,72℃延伸5min,可获得多态性较高的扩增结果。 6 EMS处理后,试管苗的RAPD分析也检测出一些植株较对照发生了变化。从文中扩增图谱来看,以S7为引物时,有8株单株与对照相比扩增谱带发生了变化;以S10为引物时,与对照相比,共有13株试管苗的潜带发生了变化;以V08为引物时共有12株 试管苗的谱带数目与对照相比发生了变化。7经EMS处理后的植株转入到l,/2 MS*蔗糖3%+琼脂0.5%+份AO.5 rng.L一l峨co.l%的培 养基中可获得良好的生根效果,其中0.1%EMS处理o.sh后植株的生根效果最好,平 均根长为3.89cm,平均根数达3.00条。