耐高温高产酒精酵母的分离鉴定及其应用研究

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在全球环境恶化和能源危机日益严峻的今天,酒精作为一种可利用的绿色能源,正逐渐成为各国能源发展的战略方向。其生产方法以微生物发酵为主,工业上,通常采用酵母在30~33℃条件下发酵,但其发酵后期温度高达38℃,必须采用降温手段以维持正常生产,需要消耗大量能源。因此耐高温高产酒精酵母的选育,在工业生产上具有重要意义。本研究从不同来源的基质中分离得到127株酵母菌,经四级筛选,最终获得一株适宜以玉米为原料,在高温条件下可进行浓醪酒精发酵的高产酵母菌株,编号为A27。对A27进行形态和生理生化鉴定实验:发酵糖类试验,可发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖,不发酵乳糖和半乳糖;同化碳源试验,可同化棉子糖、半乳糖、麦芽糖、海藻糖、蔗糖,不同化纤维二糖、肌醇、核糖、赤藓糖醇、鼠李糖、乳糖、木糖、核糖醇、柠檬酸、玻拍酸、甘露醇、可溶性淀粉、阿拉伯糖;同化氮源试验,不能同化硝酸盐、盐酸乙胺、盐酸尸胺;可在无维生素培养基上生长;可在50%(w/w)葡萄糖酵母膏培养基中生长;37℃下可生长;不能在100ppm放线菌酮中生长。参照《The Yeasts a taxonomic study))(第三版),鉴定A27菌株属于酵母属(Saccharomyces)的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。对A27进行分子水平鉴定实验,利用酵母菌种鉴定目前国际上通用的26S rDNAD1/D2区对A27进行分子鉴定,结果表明对A27的26S rDNA D1/D2区扩增序列与GenBank上报道的酿酒酵母26S rDNA D1/D2区同源性达到99%。因此,在分子生物学水平上进一步确证了A27菌株为酵母属(Saccharomyces)的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。对A27进行生理特性研究,确定了A27生长和发酵的适宜温度和pH值;研究了温度、pH和接种量对生长曲线和发酵曲线的影响;研究了A27菌株的耐酸碱;耐酒精;耐盐;耐糖;耐发酵副产物和耐高温特性。结果表明,其适宜生长温度为36℃,适宜生长pH为4.5,发酵适宜温度为36℃,发酵适宜pH为4.5:温度和接种量对生长曲线和发酵曲线的影响显著,pH对生长曲线和发酵曲线的影响不显著;耐酒精能力为18%(v/v),耐盐能力为9%,可在50%(w/w)的葡萄糖溶液中发酵;并对乙酸、乳酸和甘油有一定的耐受能力;能耐受54℃高温,在40℃玉米醪中发酵,酒精体积分数为10.7%(v/v)。4.采用四因素四水平正交试验确定了A27菌株的浓醪酒精发酵工艺。浓醪发酵的工艺条件为:料水比为1∶2,接种量4.5%,发酵时间84h,初始pH值4.5。在此条件下进行10L发酵罐小试,72h后酒精体积分数为14.1%(v/v)。
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