论文部分内容阅读
月季(Rosa chinensis)、玫瑰(Rosa rugosa)和野蔷薇(Rosa multiflora)为蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa L.)的三个物种,是世界著名的观赏植物之一。月季因其花型秀美,耐修剪能力强,在我国广泛栽培。玫瑰、野蔷薇也都具有重要的经济价值。虽然月季、玫瑰和野蔷薇之间的亲缘关系相对较近,但它们在形态上有明显差异。目前为止对蔷薇属植物的研究,大多数报道集中在植物的再生和遗传转化上,而对月季玫瑰等蔷薇属植物跟花色花香相关基因的研究甚为缺乏。本研究对月季、玫瑰和野蔷薇的转录组数据进行生物信息学分析,将蔷薇属三物种的MYB类转录因子与其他模式物种进行聚类分析和表达谱分析,从转录组测序结果中筛选出全长MYB基因的序列,设计引物,从玫瑰基因组DNA或cDNA文库中扩增得到包含全长CDS的玫瑰MYB基因,再挑选全长的玫瑰MYB基因分别构建超量表达载体。主要的研究结果如下：1.从草莓基因组中共鉴定出198个MYB家族基因,并统一命名,对其基因结构以及在染色体上的分布进行了比较分析,发现基因中内含子数目从0-19个不等,在各染色体上分布并不均匀,在第6和第5号染色体上分布最多且在染色体两端分布最密集。2.从蔷薇属三物种月季,玫瑰和野蔷薇转录组数据中共得到了79不同的全长MYB基因。其中,属于1R类型的MYB基因有34个。将这79个基因在蔷薇属三物种中进行差异表达分析,发现在任意两个物种中至少有37个MYB基因的表达量差异显著。同时,将这些基因与草莓和拟南芥中的MYB基因家族进行了系统发育分析。3.从玫瑰转录组中挑选出5个拥有全长CDS区的MYB基因,以玫瑰基因组DNA或cDNA文库为模板,扩增出全长基因。其中属于1R类型MYB基因的为RrMYB2和RrMYB10,属于R2R3类型MYB基因的为RrMYB3, RrMYB6和RrMYB8。4.将以玫瑰基因组DNA为模板扩增的RrMYB8,以玫瑰cDNA文库为模板扩增的RrMYB2, RrMYB3,以及RrMYB10基因分别构建成pCAMBIA2300s超表达载体pCAMBIA2300s-RrM/B2, pCAMBIA2300s-RrM/B3,pCAMBIA2300s-RrMYB8,pCAMBIA2300s-RrMYB10),以玫瑰cDNA文库为模板扩增的RrMYB6构建成PMV超量表达载体(PMV-RrMYB6),将构建好的5个超量表达载体电转化农杆菌EHA105进行保存。