番木瓜脂肪酶的制备及催化氟比洛芬甲酯拆分

来源 :哈尔滨商业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xtinxtin
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番木瓜作为一种农副产品,具有很好的市场发展和科研价值,其功能较多,可以减肥,可以作为食品添加剂;而作为植物来源的脂肪酶,其又具有很高的生物催化功能,成本较低。本论文主要研究了以下几个方面:(1)本文首先选择对番木瓜脂肪酶进行提纯和其水解活力的测定,利用其天然固定化的性质,成功纯化得到占总重量13%的番木瓜脂肪酶;对番木瓜脂肪酶水解活性进行了测定,结果为90U/g。冻干时间在8h时其水解活力最高,番木瓜脂肪酶的水解活力在35℃时最佳,30-40℃都有较好的活力,pH为8.0时酶活力最高,在pH6-10范围内很稳定;其热稳定性高,在不同温度下保存6h,其水解活力损失很小。而且对于低极性的有机溶剂有很好耐受性。(2)在非水相体系脂肪酶催化拆分氟比洛芬甲酯的实验中,用单因素实验分别考察了脂肪酶的添加量,缓冲溶液的添加量,反应温度,摇床转速,反应时间对拆分效果的影响。并得到结果:在反应溶剂为异辛烷的非水相体系中,浓度为10mg/mL的氟比洛芬甲酯溶液中,加入70mg番木瓜脂肪酶,5%的缓冲液,在35℃下,摇床150rpm条件下反应168h。最大转化率C为14%,产物对映体过量值eep为87%。(3)由于用番木瓜脂肪酶得到的产物对映体过量值较低,设计了一种利用对映体选择性相反的两种脂肪酶催化二次动力学拆分方法。首先选用R选择性的Novozym 435月脂肪酶对对外消旋的氟比洛芬甲酯进行第一次拆分,然后选用S选择性的番木瓜脂肪酶对S过量的剩余底物氟比洛芬甲酯在同样的反应体系中进行第二次拆分。采用二次拆分比单一脂肪酶拆分效果好,产物对映体过量值为91%。
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