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本文采用共振散射法系统地研究了血红蛋白(Hb,hemoglobin)分别与有机酸性染料:铬天青S、曙红、铝试剂及茜素红的相互作用。探讨了血红蛋白与以上不同染料反应的最佳条件、影响因素,建立了测定血红蛋白的新方法并对实际样品进行了测定。本文的四种方法:操作方便,试样前处理简单,成本低,为血红蛋白的分析测定提供了一些借鉴。本论文全文分为五章。
第一章为绪论,介绍了有关血红蛋白分析测定的研究进展,对使用的方法进行了综述,并提出了实验设想。
第二章用共振散射法研究了铬天青S与血红蛋白的反应。首先考察了使用不同pH值缓冲溶液的反应情况。在实验中发现,加入pH3.80的Clark-Lubs缓冲溶液后,反应现象明显,并且在378nm处有最大散射值。共振散射强度的增加值△I与血红蛋白浓度在一定范围内(0.04-9.60μg/mL)呈线性关系,线性回归方程为:△I=18.36CHb+6.403,相关系数R=0.9967,检出限为0.029μg/mL。将方法用于人尿液中血红蛋白含量的测定,结果满意。同时进行了离子强度试验和表面活性剂试验,初步研究了反应机理,铬天青S与血红蛋白之间主要以静电引力相结合。
第三章用共振散射法研究了曙红与血红蛋白的反应。实验中比较了多种酸性缓冲溶液对反应的效果,使用pH3.20的Clark-Lubs缓冲溶液能有较好的实验现象,并确定了最佳反应条件,探讨了影响因素。在362nm处、血红蛋白浓度在0.16-8.80μg/mL范围内与共振散射强度增值△I呈正比关系,线性回归方程是:△I=14.01CHb-2.193,相关系数R=0.9980,检出限为0.071μg/mL。方法可用于测定人尿液中微量血红蛋白含量。
第四章用共振散射法研究了铝试剂与血红蛋白的反应。在pH4.88的醋酸钠-醋酸(NaAc-HAc)缓冲溶液中,铝试剂与血红蛋白发生反应,使体系的共振散射强度增强,最大散射波长位于438nm处,在最佳条件下,测定血红蛋白的线性范围是0.048-9.60μg/mL,线性回归方程:△I=18.19CHb-3.956,相关系数R=0.9960,检出限为0.031μg/mL。将方法用于人尿液中血红蛋白含量的测定,结果满意。
第五章运用共振散射法研究了茜素红与血红蛋白的反应。比较了在不同酸性溶液中的反应情况,确定使用稀硫酸溶液为反应介质。在最佳条件下,在最大散射波长520nm处,共振散射强度的增加值△I与血红蛋白浓度在0.05-14.00μg/mL间呈正比关系,线性回归方程是:△I=23.11CHb-4.550,相关系数R=0.9981,检出限为0.013μ g/mL。方法用于经前处理后人尿液中血红蛋白含量的测定,结果满意。