EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3的凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

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目的初步探讨不同质量浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增值及凋亡的影响及对Survivin蛋白表达的变化,从而为EGCG在雄激素非依赖性前列腺癌(Androgen Independent Prostate Cancer, AIPC)的临床治疗中提供理论依据。方法1.使用不同质量浓度的EGCG(0、20、40、80μg/ml)处理前列腺癌细胞株PC-3,倒置显微镜下观察细胞的形态学改变。2.使用不同质量浓度的EGCG(0、20、40、80μg/ml)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增值曲线及克隆形成实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响。3.流式细胞仪检测EGCG处理PC-3细胞株48h后,不同质量浓度(0、20、40、80μg/ml)EGCG对PC-3细胞周期及凋亡的影响。4.用RT-PCR法检测不同质量浓度(0、20、40、80μg/ml)EGCG作用48h后,Survivin mRNA在PC-3细胞中的表达差异。5.用Western blot法检测不同质量浓度(0、20、40、80μg/ml)EGCG作用48h后,Survivin蛋白在PC-3细胞中的表达差异。结果1.倒置显微镜下观察,对照组细胞贴壁生长,细胞呈多角形,胞质饱满,相邻细胞相互融合。经EGCG处理后,随着浓度增加和作用时间的延长,细胞开始变圆,体积减小,核固缩出现,核颜色加深,折光性增强,部分细胞出现漂浮及坏死的现象,表现为浓度与时间依赖性。2.不同质量浓度的EGCG(0、20、40、80μg/ml)处理PC-3后,经细胞增值曲线及克隆形成实验检测:与对照组比较,EGCG能明显抑制PC-3细胞的增殖(P<0.05)。3.EGCG能诱导细胞凋亡,(0、20、40、80μg/ml)EGCG处理PC-3细胞48h后,凋亡率分别为:(1.96±0.90)%、(3.11±1.37)%、(12.32±1.82)%、(26.51±2.19)%,与对照组比较,各实验组凋亡率明显增加(P<0.05)。4.流式细胞术显示:(0、20、40、80μg/ml)EGCG作用PC-3后,停滞在G0/G1期细胞百分率分别为:(30.66±1.30)%、(35.28±2.02)%、(43.78±2.23)%、(56.8±2.01)%。与对照组比较,各实验组G1期细胞百分率明显增加(P<0.05),呈浓度依赖性(P<0.05)。5.不同质量浓度(0、20、40、80μg/ml)EGCG处理PC-3后,Survivin mRNA的表达明显下调,呈浓度依赖性(P<0.01)。6.不同质量浓度(0、20、40、80μg/ml)EGCG处理PC-3后,Survivin蛋白的表达明显下调,呈浓度依赖性(P<0.01)。结论EGCG在体外能够抑制前列腺癌PC-3的增殖,并表现为浓度和时间依赖性,即随着药物浓度的增加和作用时间的延长抑制作用越明显;EGCG能诱导前列腺癌PC-3的凋亡,将细胞阻滞于G0/G1期,呈现为浓度依赖性。其机制可能与下调Survivin的表达有关。
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