由黄单胞菌引起的白叶枯病与细菌性条斑病（细条病）是严重危害水稻生产的两种代表性细菌性病害,给水稻安全生产带来巨大隐患。抗病品种的培育与种植是控制这种病害最经济、环保的措施,鉴于高抗白叶枯病的基因资源相当有限,且当前尚未从水稻中克隆出一个细条病抗性基因,因此通过对已克隆基因的改造利用是培育同时抗白叶枯病与细条病的双抗性水稻品种的重要补充途径,更是最快捷的手段。转基因作物的安全性是人们关注的焦点,无选择标记且外源基因表达符合预期的转基因作物是获批安全应用证书的基本要求。然而无标记的目标外源基因由于无侧翼序列的保护,经常出现非预期表达。为了解决上述问题,我们在标记基因去除的载体系统-双右边界载体的基础上,以白叶枯病抗性基因Xa27为基因改造对象,在其启动子中插入多个受白叶枯病与细条病菌TAL效应因子（transcription activator–like effectors,TALE）识别转录激活的元件（TALE binding-elements,EBE）,并保留Xa27基因启动子EBE元件上游1149 bp,终止子后再添加一个反向的水稻种子16 KD醇溶蛋白基因终止子（16KD）避免反向内源启动子影响。主要结果如下:1.通过比较课题组前期获得无标记转Xa21基因水稻及无标记转Xa23基因水稻的田间抗性表现及表达分析,结果揭示外源基因整合位点处内源启动子的存在可能是导致外源基因非预期表达的主要因素。2.利用农杆菌转化法,分别将植物表达载体pDRB-Xa27、pDRB-Xa27-KD转入水稻品种TP309中,经分子鉴定后各得到2株无标记转基因植株,抗性鉴定结果显示两种转基因植株对白叶枯病和细条病均表现出的较强抗性;表达结果显示:添加反向16KD终止子的2株转基因植株的外源基因Xa27受白叶枯病与细条病菌诱导表达,且只有正向转录本存在,表达符合预期;而2株未添加16KD终止子转基因植株的中一株能检测到反向转录本,表达不符合预期。结果表明:添加16KD终止子能有效阻止外源基因3’端整合位点处启动子对外源基因的逆向转录,从而降低外源基因非预期表达。3.建立了通用便捷的的SNP检测体系,通过对T1代pDRB-Xa27-KD-1,pDRB-Xa27-KD-2转基因水稻检测,最终获得2株无标记基因且携有Xa27的植株。