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斑点叉尾鮰维氏气单胞菌病是一种以严重腹水、肠炎和内脏器官的广泛岀血为典型症状的急性传染病,该病传染速度快、病死率高,对水质情况不佳、鱼体免疫力低下的养殖塘有着极其严重的威胁。本研究于2017年11月中旬从四川乐山井研县患病斑点叉尾鮰肝脏、脾脏、肾脏等多处组织器官分离到一株革兰氏阴性菌,经过回归实验确认其致病性,再经过细菌形态、生理生化特性、16S与gyrB基因构建系统发育树等方法鉴定其为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）,命名为XH.VA.2。扫描电镜显示为表面光滑的短杆状细菌,平均长度2.777±0.61μm,平均宽度0.843±0.098μm。生长曲线测定结果显示该菌在第12 h后进入平台期。该病原对氧氟沙星,氟苯尼考,环丙沙星,卡那霉素,诺氟沙星,头孢拉定等6种药物敏感。组织病理学观察显示:鳃、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和肠道发生不同程度的以中性粒细胞为主的炎性细胞浸润,其中以脾脏和肾脏的病变最为严重。为了进一步对病原菌的致病性进行深入研究,本实验对维氏气单胞菌分离株XH.VA.2进行了全基因组测序和分析。全基因组测序得到XH.VA.2基因组大小为4.91Mb,GC含量58%,编码4640个基因。将基因组序列上传NCBI,得到登录号:NZQQOQ01000000。将XH.VA.2全基因组与环境分离株A.veronii B565（GenBank:CP002607）进行比较基因组学分析。在XH.VA.2基因组中找到了一段编码侧鞭毛的特异性基因簇（36,778 bp）。同时,通过VFDB毒力因子数据库进行比对发现XH.VA.2含有35个侧鞭毛相关基因,而在B565中的相关基因均缺失。综合比较基因组学的结果,相较于B565在XH.VA.2上发现了一段特异性的侧鞭毛基因簇,这可能是病原菌XH.VA.2毒力的分子基础。为了验证比较基因组学的分析结果,探究这段侧鞭毛基因簇是否为病原菌XH.VA.2毒力的分子基础。因此,选取XH.VA.2侧鞭毛基因簇中与侧鞭毛免疫原性和抗原性相关性最大的两个侧鞭毛丝基因（lafA1与lafA2）。构建大肠杆菌原核表达系统表达进行表达,结果显示重组侧鞭毛丝蛋白LafA1与LafA2均以包涵体的形式出现。SDS-PAGE检测结果显示两个蛋白大小均约为50.7 kDa。Western blot分析表明,兔抗组氨酸标签蛋白血清能分别特异性结合LafA1重组蛋白和LafA2重组蛋白。然后将LafA1与LafA2蛋白分别与弗氏不完全佐剂等比例乳化后,腹腔注射免疫健康斑点叉尾鮰。于免疫后七周内分别选取七个时间点采集血清,对血清非特异性免疫指标（血清总蛋白、血清白蛋白、碱性磷酸酶、补体C3、超氧化物歧化酶、溶菌酶）进行检测,以期能够了解LafA1与LafA2蛋白是否具有免疫原性。同时,在免疫后28 d攻毒(50 LD50),记录14 d内各组死亡率并计算两个蛋白组对斑点叉尾鮰的相对保护率。结果显示,两个免疫实验组免疫因子含量或活性均呈现先升高后降低,最终除溶菌酶以外的其余指标均与对照组差异不显著（P>0.05）的类似规律。在整个实验周期内两个实验组各免疫因子的含量或活性水平均大致相当。两个蛋白组在第四周时总蛋白含量均与对照组有极显著上升（P<0.01）;两个蛋白组在第三周时白蛋白含量均与对照组有极显著上升（P<0.01）;两组从第一周到第五周的实验周期内碱性磷酸酶含量均与对照组相比有极显著上升（P<0.01）;两组在第四周时补体C3含量均与对照组有极显著上升（P<0.01）;两组从第二周到第五周的实验周期内T-SOD含量均与对照组相比有极显著上升（P<0.01）;在整个实验周期内,两个蛋白组血清溶菌酶含量均与对照组组有极显著上升（P<0.01）;LafA1与LafA2组相对保护率结果分别为36.67%和33.33%,表明两个蛋白的免疫组对斑点叉尾鮰均具有一定的免疫保护效果。研究表明,LafA1和LafA2蛋白具有一定的免疫原性,侧鞭毛基因簇也可能是病原菌XH.VA.2毒力的分子基础。同时,LafA1和LafA2蛋白也能够帮助斑点叉尾鮰抵抗维氏气单胞菌的感染,可作为开发该菌亚单位疫苗的候选蛋白。