背景与目的： 细胞衰老是个复杂而渐进的过程。A型核纤层蛋白前体(prelaminA)加工成熟出现异常则导致早老症(HGPS)的出现，推测prelamin A的结合蛋白在细胞衰老过程中起着重要作用。人血管内皮生长因子B(vascular endothelialgrowth factor B，VEGF-B)是一种近年来发现的血管内皮生长因子家族的新成员，结构与VEGF较为相似，并选择性与VEGF的受体之一VEGFR-1结合。VEGF-B参与血管生成，神经细胞的保护，胚胎发育等生理过程也参与肿瘤发生的病理过程。本实验室前期工作初步证明VEGF-B是一个prelamin A相互作用的蛋白，本研究进一步通过一对一回复杂交实验、细胞外蛋白沉降实验(GST pull-down)和细胞内定位等方法证明其与prelamin A在细胞内外的相互作用，并探讨该蛋白在细胞衰老中的作用。 方法： 构建pGBKT7-PLA质粒，转入酵母菌AH109进行自主激活报告基因和毒性检测后，再将pACT2-VEGF-B转染到酵母AH109中进行一对一回复杂交实验；构建原核表达载体pET-32a-VEGF-B和pGEX-4T-1-PLA，分别进行VEGF-B和prelamin A的原核表达，通过GST pull-down实验证明两者在体外的相互作用；将构建的pEGFP-N1-VEGF-B和pDsRed2-N1-PLA融合表达质粒转染人胚肾细胞293(HEK-293)和衰老表型的人胚肾细胞293PLA(HEK-293PLA)，荧光显微镜下观察VEGF-B在两种细胞内与prelamin A共定位情况。采用RT-PCR和Western blot等方法检测VEGF-B在HEK-293和HEK-293PLA细胞中VEGF-B的mRNA转录和蛋白表达情况，从而探讨VEGF-B在衰老细胞中的作用。 结果： 成功构建了pGBKT7-PLA穿梭质粒，证实prelaminA的表达对酵母AH109没有毒性和对报告基因没有自主激活活性。一对一回复杂交实验证明VEGF-B和prelamin A在酵母菌内能够相互作用，同时GST pull-down实验证明它们的结合在细胞外同样发生。细胞定位结果表明VEGF-B定位在细胞核内，并与prelamin A在HEK-293细胞核膜上共定位。RT-PCR和Western blot结果显示与正常的HEK-293细胞相比，VEGF-B在HEK-293PLA细胞中mRNA转录和蛋白表达水平明显下降。 结论： VEGF-B和prelamin A在细胞内外均有相互作用，两者能共定位于HEK-293细胞核膜。在衰老表型细胞HEK-293PLA中VEGF-B表达下调，表明该蛋白的表达与细胞衰老密切相关。