诱导肿瘤细胞分化，因其良好的治疗效果和相对较弱的不良反应，是近年来针对肿瘤治疗，尤其白血病治疗的研究热点。已有的研究证明，angiocidin，利用来源于血小板凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）多肽CSVTCG-琼脂糖亲和层析柱从肺癌细胞中分离得到了一种蛋白质，具有诱导THP-1细胞，一种经典的单核细胞白血病细胞系，分化为成熟的巨噬细胞的作用。而这些作用可以通过MAPK、NF-κB和PI3K三条信号通路介导实现。S5a，胞内26S蛋白酶体亚单位，在蛋白质序列上和angiocidin基本一致。本实验室前期的实验已证明，S5a可以诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞，并且在能够在THP-1细胞膜上与死亡受体6（Death Receptor6）结合。但是其结合活性，结合方式，以及这种结合在S5a诱导分化的过程中是否起作用，如何作用，都还未知。本论文将从以下两个部分，阐述死亡受体6（DR6）在S5a的作用下，介导THP-1细胞分化的机制。第一部分S5a和DR6的结合活性分析。首先，为了验证DR6在介导THP-1细胞分化过程中的作用，我们给予DR6干扰RNA，或者可溶性DR6受体，通过对细胞表面标志和细胞吞噬能力的检测，发现S5a诱导THP-1细胞分化的能力明显减弱。这就证明了DR6在S5a诱导THP-1细胞分化过程中，发挥了重要的作用。随后，通过酶联免疫吸附试验，证明了DR6和S5a是在高亲和力的作用下结合的，EC50=145±13nM。同时，我们还通过计算机模拟分析了DR6和S5a的相互结合，并得到了两种最可能的结合方式，以及几个可能的关键氨基酸结合位点。第二部分S5a通过DR6诱导THP-1细胞分化的机制研究。在前期的研究中，检测到了NF-κB信号通路经典途径中的蛋白磷酸化P65，在S5a诱导THP-1细胞分化过程中的表达量升高。为了进一步深入研究NF-κB信号通路在S5a诱导THP-1细胞分化过程中的作用，我们检测了NF-κB非经典通路中的蛋白P52的表达，同时检测了下调膜受体DR6后P-P65和P52的表达。为了研究NF-κB信号通路经典和非经典途径在S5a诱导THP-1细胞分化过程中的作用，我们使用了NF-κB抑制剂分别抑制了NF-κB经典和非经典途径，并通过细胞形态学和功能学观察了S5a诱导THP-1细胞分化的情况。由此我们得到了NF-κB信号通路的激活在S5a诱导THP-1细胞分化的过程中起到了重要的作用的结论。此外，我们还观察了在S5a诱导THP-1细胞分化过程中，在血液系统的调节中起关键作用的转录因子c-myb的变化。在给予THP-1S5a诱导后，c-myb的mRNA水平明显下调，而DR6siRNA干扰可以抑制c-myb的下调。这些结果提示转录因子c-myb也在S5a诱导THP-1细胞的过程中起到了关键的作用。本课题在实验室前期的研究基础上，确认了死亡受体6（DR6）可以和S5a功能性结合，并且介导了THP-1细胞的分化。定义了S5a为DR6的新配体。通过深入研究S5a诱导单核白血病细胞THP-1分化的机制，确认了膜受体DR6和细胞内NF-κB信号传导通路以及转录因子c-myb在S5a诱导THP-1分化过程中的重要作用，并为本课题组后续的机制研究打下基础。本研究将为细胞外信号触发的细胞分化研究提供基础资料，所得到的膜受体DR6很可能是白血病生物治疗在诱导细胞分化方向上重要的新的靶点，这也将为肿瘤生物治疗尤其在肿瘤细胞诱导分化方向上开辟新的研究领域。