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研究背景食管癌(Esophageal Cancer,EC)是目前世界范围内第七位高发肿瘤,也是癌症相关主要死因之一。食管癌的5年生存率仅为20%左右,每年大约有45.6万新发病例。食管癌的分布具有典型的地区差异性特征,其中以伊朗北部、中亚及中国北部为高发地区。食管癌分为鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)和腺癌(Esophageal Adenocarcinoma),其中以鳞癌最为常见。ESCC的复发和转移是抗肿瘤治疗失败的主要原因,也是患者死亡的主要原因,因此研究ESCC的分子机制,寻找新型靶点对于食管癌的诊断和治疗意义重大。本课题组对3例ESCC患者的肿瘤组织及其相应癌旁组织进行全基因组重测序。测序结果显示SULT2B1是显著下调基因之一,而SULT2B1在食管鳞癌中的功能及作用相关机制尚未有人报道。因此我们选择SULT2B1进行进一步研究与分析。研究目的本课题组研究目的是探索SULT2B1与食管鳞癌患者预后关系,以及其在食管鳞癌中发生发展中的作用。研究方法:1.临床标本的收集实验中所用全部新鲜组织标本,均来自河南省林州市人民医院食管鳞癌患者,每例患者包含食管鳞癌组织及其配对的切缘阴性的正常食管上皮组织(手术切除)。提取组织RNA,用于检测SULT2B1的mRNA表达水平。另外,299例石蜡包埋组织样本来自林州人民医院从2001-2007年间进行食管鳞癌根治切除手术患者(每例患者包含肿瘤组织及其配对的切缘阴性的正常食管上皮组织),这些样本于中山大学肿瘤防治中心建立全套食管鳞状细胞癌组织芯片,其中包括完整临床病理信息和随访资料。2.方法通过RT-qPCR检测SULT2B1在新鲜组织标本中的mRNA表达水平;通过免疫组化检测SULT2B1在组织芯片中的蛋白表达水平,并分析SULT2B1的表达水平与临床病理特征之间相关性及与临床预后的相关性。用MSP和BGS方法检测SULT2B1启动子区CpG岛的甲基化状态。为了研究SULT2B1的生物学功能,我们通过慢病毒(Lentivirus)包装系统将SULT2B1表达质粒及空载体对照质粒分别转染到食管癌细胞株EC109和EC9706中,并筛选出稳定表达SULT2B1的细胞。另外我们用慢病毒包装系统将SULT2B1敲降质粒(shRNA)及对照质粒转染食管癌细胞株KYSE510,最终筛选出两个sh序列可以稳定敲降SULT2B1。以上稳转细胞均需用RT-qPCR及Western bloting进行mRNA及蛋白水平鉴定。通过体内外功能实验研究SULT2B1对食管癌细胞体内外生长的影响以及SULT2B1对食管癌细胞侵袭及迁移能力的影响。研究结果结果显示SULT2B1在食管癌组织及大部分细胞株中的普遍表达降低。同时组织芯片结果分析SULT2B1低表达与ESCC患者的临床分期(TNM)及淋巴结转移显著相关。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,SULT2B1低表达患者的总生存期显著降低。COX多因素回归分析结果显示,SULT2B1的表达水平是影响食管鳞癌患者生存的独立预后因素。我们还发现SULT2B1启动子区域CpG岛常常发生甲基化,导致其在食管癌中低表达。体内外功能实验显示SULT2B1可以抑制食管鳞癌细胞增殖及移动能力、降低尾静脉注射肿瘤细胞而导致肺转移瘤的形成概率,以上结果提示SULT2B1在食管鳞癌中可起到抑制肿瘤增殖及转移的抑癌基因作用。结论SULT2B1在食管鳞状细胞癌中表达下调,是不良预后因素之一,能够抑制肿瘤细胞的增殖和转移。