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背景:胰腺癌是恶性程度极高的消化道肿瘤之一,近年来发病率呈上升趋势,且具有发现晚、预后差、中位生存期短、5年生存率低等特点。目前,胰腺癌的分子靶向治疗正在研究中,临床上仍以手术、放化疗为主要的治疗手段。肿瘤热疗,是一种通过加热技术使肿瘤病灶温度升高到一定程度,借以杀灭肿瘤细胞的一种治疗方法。近年来,随着热疗设备、技术等不断提高,热疗在临床中被普遍应用并取得一定效果。研究发现claudin蛋白(闭合蛋白)是细胞间紧密连接结构的重要组成部分。其家族成员claudin-18.2蛋白在正常情况下仅低水平表达于胃部已分化的壁细胞中,但在多种肿瘤中显著上调,包括80%的胃肠道腺瘤及60%的胰腺肿瘤等。其功能可能与细胞间黏附相关。目前II期临床试验结果显示,以claudin-18.2蛋白为靶点的抗体IMAB362联合化疗方案,可以显著提高胃部肿瘤患者的无进展生存期和总生存期。这一临床试验结果为提高肿瘤患者治疗效果带来新的希望。因此claudin-18.2蛋白成为目前肿瘤治疗中的研究热点之一。目的:本实验通过免疫细胞化学和Western Blot法(蛋白质印迹法)观察人胰腺癌PANC-1细胞claudin-18.2蛋白表达情况以及热疗、化疗对PANC-1细胞claudin-18.2蛋白表达的影响,旨在探究热疗对胰腺癌治疗的影响,以及热化疗对人胰腺癌细胞的作用,为热疗、化疗在临床中的应用及抗体IMAB362在胰腺癌治疗中的开发提供更多的理论支持。方法:本实验采用人胰腺癌细胞系PANC-1细胞进行以下研究:(1)细胞抑制率检测:将细胞分为对照组、单独热疗组、吉西他滨化疗组、5-氟尿嘧啶化疗组、两药联合组、两药联合加热疗六组,采用MTT(噻唑蓝)法检测不同组人胰腺癌PANC-1细胞抑制率,同时以这六组作为之后实验的分组标准。(2)通过苏木精-伊红法(HE)染色法观察人胰腺癌PANC-1细胞形态,比较热疗、化疗对人胰腺癌PANC-1细胞形态的影响。(3)通过免疫细胞化学法检测观察人胰腺癌PANC-1细胞claudin-18.2蛋白表达情况,比较热疗、化疗对claudin-18.2蛋白表达的影响。(4)通过Western Blot法半定量地检测人胰腺癌PANC-1细胞claudin-18.2蛋白的表达。结果:(1)MTT实验结果显示:单独热疗对PANC-1细胞增殖具有一定抑制效果(P<0.05)。两药联合加热疗对细胞增殖的抑制效果最佳,两药联合效果其次,单独化疗效果要优于单独热疗。(2)HE染色结果显示:正常对照组细胞团簇样生长良好,核大偏位。经热疗处理后人胰腺癌PANC-1细胞体积增大;化疗组细胞呈纺锤样,胞浆中可见空泡。两药联合外加热疗组细胞浆中空泡进一步增多,提示肿瘤细胞损伤加重。(3)免疫细胞化学结果显示:claudin-18.2蛋白在PANC-1细胞的细胞膜上呈现清晰棕黄色免疫反应,约占70%。单独热疗可以使claudin-18.2蛋白的表达明显升高。吉西他滨组、5-氟尿嘧啶组、吉西他滨联合5-氟尿嘧啶组claudin-18.2蛋白的表达降低。两药联合外加热疗组claudin-18.2蛋白的表达较两药联合组略有增加。(4)Western Bolt结果与免疫细胞化学结果一致。结论:人胰腺癌PANC-1细胞表达claudin-18.2蛋白。热疗可增加claudin-18.2蛋白表达,吉西他滨及5-氟尿嘧啶可降低claudin-18.2蛋白表达。热疗联合化疗可进一步提高胰腺癌的治疗效果。推测热疗可以增强细胞间紧密连接,应用抗体IMAB362靶向治疗胰腺癌时联合热疗可提高治疗效果。