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目的:本研究以补肾中药菟丝子黄酮及六味地黄丸作为干预手段,以体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞作为研究对象,运用血清药理学的方法,观察补肾中药干预雷公藤多苷(GTW)对原代培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及分泌雌二醇的影响,从而探讨雷公藤多苷对雌性生殖毒性的机制及补肾中药的防护作用机理。为临床安全有效的应用雷公藤多苷提供科学参考依据。 方法:3周龄的SD雌性幼鼠皮下注射PMSG(孕马血清促性腺激素),48小时后脱臼处死大鼠,获取卵巢颗粒细胞。取4周龄SD雌性幼鼠,采用血清药理学的方法,分别制备雷公藤多苷组、雷公藤多苷加六味地黄丸组、雷公藤多苷加菟丝子黄酮组含药血清,并设空白组。卵巢颗粒细胞,预培养后分别与四组血清在体外共同培养,收集培养液,用MTT法检测其作用12h、24h、48h时对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响;用放射免疫方法检测其作用12h、24h、48h时大鼠卵巢颗粒细胞的雌二醇(E2)分泌量;采用SP法检测其作用24h时对大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2蛋白表达。 结果:(1)放射免疫结果显示,空白组与雷公藤多苷组分泌雌二醇比较,12h、24h无统计学意义(P>0.05),48h有极显著性差异(P<0.01),12h、24h、48h中药干预两组均较雷公藤多苷组增加,黄酮组高于六味组,三个时点统计学分析,黄酮组与雷公藤多苷组相比有显著性差异(P<0.05),六味组均值较雷公藤多苷组升高,统计学分析无显著性差异(P>0.05);(2)OD值结果显示,12h、24h、48h三个时点雷公藤多苷组OD值最低,与空白组相比均有极显著性差异(P<0.01);三个时点中药干预各组OD均值较多苷组高,统计学分析黄酮组、六味组与雷公藤多苷组相比都有极显著意义(P<0.01);(3)SP法检测Bcl-2蛋白表达结果显示,GTW组Bcl-2表达测值明显少于空白组,统计学分析有极显著性差异(P<0.01),提示雷公藤多苷组抑制Bcl-2表达。黄酮组、六味组Bcl-2表达与雷公藤多苷组相比均有极显著性差异(P<0.01),且黄酮组表达较六味组有所增强,两组间统计学分析无显著性差异(P>0.05)。 结论:雷公藤多苷对体外培养的卵巢颗粒细胞具有一定的影响。表现在上清液雌二醇分泌减少,细胞增殖能力的下降、促进细胞凋亡。菟丝子黄酮和六味地黄丸能明显促进颗粒细胞增殖,有效的延缓了颗粒细胞的凋亡,从而对抗雷公藤多苷对卵巢颗粒细胞增殖的抑制及促进凋亡的作用。六味地黄丸对雷公藤多苷所致SD幼鼠生殖损伤的改善作用不明显,菟丝子黄酮能明显促进雌二醇的分泌,从而干预实验性SD幼鼠雷公藤多苷所致生殖损伤。