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第一部分磁性氧化铁纳米颗粒与脂质体介导EGFP基因转染内皮祖细胞的比较研究目的评价精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒(nano-Fe2O3-arginine)及脂质体作为基因载体在针对外周血来源的内皮祖细胞转染中的可行性,并对两者的转染效率进行比较。
方法:将nano-Fe2O3-arginine及LipofectamineTM2000作为基因载体连接绿色荧光蛋白pcDNA3.1(+)-myc-HisC/EGFP质粒在体外转染兔外周血来源的内皮祖细胞,荧光显微镜观察转染结果并计算转染效率;转染后48h采用MTT比色法测定这两种载体对内皮祖细胞增殖和功能的影响以了解其细胞毒性。
结论:脂质体作为载体转染内皮祖细胞的效率明显高于精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒,脂质体可较为有效安全地转染基因至内皮祖细胞,从而为内皮祖细胞联合基因治疗疾病奠定了基础。
第二部分磁探针标记eNoS基因修饰的内皮祖细胞及体外MR成像的实验研究目的heNOS基因体外修饰兔外周血来源的内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)后,应用纳米磁探针三氧化二铁(Fe2O3)-精氨酸(arginine)复合物体外标记基因修饰的EPCs,磁共振(MR)进行标记细胞成像。
方法:制备Fe2O3-arginine复合物。分离兔外周血单个核细胞,贴壁法筛选出EPCs,传代培养,用脂质体LipofectamineTM2000体外转染人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)基因至EPCs,转染后48h对基因修饰EPCs进行磁探针标记,普鲁士蓝染色显示细胞内铁,WesternBlot检测heNOS基因表达情况,四氮噻唑蓝(MTT)比色试验评价磁探针标记基因修饰EPCs后对细胞生长状况的影响,流式细胞分析检测标记、未标记细胞的细胞凋亡,应用MR的T1WI、T2wI、T2*WI三个序列进行细胞群成像。
结论:使用脂质体可以成功地将外源heNOS基因转染进兔外周血EPCs中并在其中有效表达,Fe2O3-arginine可以有效标记heNOS基因修饰的EPCs,其对细胞的活力、增殖等生物学特性无明显影响。临床应用型1.5TMR可在体外进行标记细胞群成像,间接反映干细胞的数量和分裂增殖状态。