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目的:人类X染色体STRs是指存在于X染色体上特异碱基短串联重复片段。近年来X染色体STRs因其高稳定性,高多态性,独特的遗传方式,在解决特殊案件中无法比拟的优点而逐渐受到重视,虽然早在1991年就有HPRTB,ARA和DXS981等X-STR基因座的报道,但当前已获得群体遗传学数据且可用于法医遗传学分析的X-STR基因座仅有30多个,X染色体STRs群体遗传学数据严重欠缺,数量不足,存在人群和种族差异,基因座间连锁关系又限制其使用,因此研究寻找更多能为法医学所使用的X-STR基因座,显得尤为重要。本课题旨在选取4个未报道群体遗传特征的X-STR基因座,即GATA151A05/GATA2B05/DXS7129/ HUMUT1595,并构建荧光标记复合扩增体系,对北方汉族人群进行群体遗传学调查,为开发国产X-STRs试剂盒、DNA数据库建立和群体遗传学研究提供基础资料。方法:1基因座的选择:选择未报道群体遗传学特征且位于X染色体上物理距离较近(<10Mb),位于同一连锁群内的4个X-STR基因座。2复合分型体系的构建:对GATA2B05、HUMUT1595、GATA151A05、DXS7129这4个已选择的X-STRs进行PCR复合扩增。在GATA2B05、HUMUT1595基因座的上游引物5’端标记6-FAM荧光,GATA151A05基因座的上游引物5’端标记HEX荧光,DXS7129基因座的上游引物5’端标记ROX荧光。优化各基因座引物浓度比例、Mg2+和Taq酶浓度、退火温度、循环次数等因素。应用ABI310及ABI3130型遗传分析仪对扩增产物进行检测,Genemapper 3.2软件分析结果并对样本进行检测分型。各基因座每一种等位基因片段随机选择一个男性样本进行测序,依据测序结果并根据国际法医遗传学会(international society of forensic genetics, ISFG)推荐的命名原则对各等位基因进行命名。3群体遗传学调查和法医学应用:应用已复合的扩增体系对北方汉族214例健康无关个体(男105例,女109例)进行群体遗传学调查。结果用Arlequin3.11软件进行分析,使用http://www.chrx-str.org网站在线计算相关法医遗传学参数。并对本室日常检案中的10例单亲鉴定案件(4例父女单亲鉴定案件,6例母子单亲鉴定案件)进行了调查,及本法医病理教研室尸检标本进行了组织同一性检验。结果:1荧光复合分型体系构建:成功建立了GATA151A05 /GATA2B05 /DXS7129 / HUMUT1595四个X-STR基因座荧光标记复合扩增体系。20μl反应体系中含引物GATA151A05、GATA2B05、DXS7129、HUMUT1595分别为6pmol、5pmol、4pmol、5pmol,Taq DNA聚合酶1U,MgCl2浓度1.5mM,采用热启动的方式进行扩增。该体系各基因座间峰型均匀、杂合子扩增均衡、无非特异性扩增、重复性好。2群体遗传学调查结果:应用该体系对北方汉族214例无关个体进行了群体遗传学调查。女性109例样本中,基因座DXS7129检出5个等位基因和8种基因型;GATA151A05检出5个等位基因和9种基因型;HUMUT1595检出8个等位基因和14种基因型;GATA2B05检出8个等位基因和18种基因型;男性105例样本中,基因座DXS7129检出5个等位基因;GATA151A05检出6个等位基因;HUMUT1595检出7个等位基因;GATA2B05检出8个等位基因。对各基因座进行哈温平衡检验,除GATA2B05基因座不符合哈温平衡外,其余三个基因座均符合哈温平衡。对符合哈温平衡的DXS7129,GATA151A05,HUMUT1595基因座进行了测序,男女等位基因频率差异性检测,基因座间连锁不平衡分析和遗传参数计算。这3个基因座各等位基因在男女之间无差别,合并计算等位基因频率(0.00309—0.7678),基因座连锁不平衡分析显示3个基因座之间相互独立。3个X-STR基因座DXS7129、HUMUT1595、GATA151A05在北方汉族人群中观察值杂合度(Ho)分别依次为:0.29358、0.60550、0.54128,多态信息量(PIC)分别依次为:0.36858、0.62258、0.58478,女性个体排除率(PDfemale)分别依次为:0.593145、0.761857、0.731926,男性个体排除率(PDmale)分别依次为:0.385692、0.602436、0.573134 ,三联体非父平均排除概率(MEC Kishida)分别依次为: 0.356211、0.522350、0.487274,二联体非父平均排除概率(MEC Desmarais Duo)分别依次为: 0.226958、0.380390、0.346576。3家系调查:在对本室日常检案中的10例单亲鉴定案件(4例父女单亲鉴定案件,6例母子单亲鉴定案件)的检测中未发现基因座突变,且这四个X-STR基因座是按照X染色体标记物特有的交叉遗传方式遗传。4组织同一性检测:该体系对同一个体的心脏、肝脏、肾脏、肌肉组织检测结果分型一致。结论:本研究建立了一组法医学遗传标记GATA151A05 /GATA2B05 /DXS7129 HUMUT1595四色荧光标记复合扩增体系,该体系分型准确、重复性好。对该体系的群体遗传学调查表明: HUMUT1595具有高度多态性,GATA151A05具有中度多态性,可用于法医学亲子鉴定和个人识别,充实了尚欠缺的X-STRs群体遗传学数据,可为开发国产X-STRs试剂盒、建立X-STRs数据库建立提供基础资料。