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目的观察人胰腺癌组织及细胞株中RECK基因的表达,探讨其与胰腺癌临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化S-P法检测42例胰腺癌及相应正常胰腺组织中RECK蛋白的表达,采用Western Blotting法检测人胰腺癌细胞株PANC-1、MIAPaCa-2和AsPC-1中RECK蛋白的表达,应用SPSS13.0软件对RECK蛋白的表达与肿瘤临床病理特征之间的关系进行统计学分析。结果RECK蛋白在三株胰腺癌细胞中均不表达。胰腺癌组织中的RECK蛋白阳性表达率为45.2%(19/42),正常胰腺组织中的阳性表达率88.1%(37/42),两者差异显著(P<0.01)。胰腺癌TNM分期为I+II期组的RECK阳性表达率(58.3%,14/24)明显高于III+IV期组(27.8%,5/18,P<0.05);无淋巴结转移组RECK阳性表达率(58.6%,17/29)明显高于有淋巴结转移组(15.4%,2/13,P<0.01);无局部浸润组RECK阳性表达率(71.4%,10/14)明显高于有局部浸润组(32.1%,9/28,P<0.05)。结论RECK在胰腺癌组织和细胞株中表达减少或缺失,与胰腺癌的侵袭转移密切相关,可能成为预测胰腺癌患者预后的一个新指标。第二部分RECK基因重组慢病毒载体的构建目的构建并包装含有RECK基因的重组慢病毒载体,为其体内外实验研究奠定基础。方法采用PCR技术从质粒克隆模板pINCY-RECK中钓取RECK基因,并将该基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-RECK,通过PCR鉴定、测序验证RECK基因,用pGC-FU-RECK转染293T细胞行Western Blotting检测RECK蛋白,将pGC-FU-RECK质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生携带RECK基因的重组慢病毒LV-RECK,测定其滴度。结果(1)pGC-FU-RECK中携有正确的RECK基因,并能在293T细胞中表达;(2)pGC-FU-RECK共转染包装细胞293T能产生重组慢病毒LV-RECK,滴度为2×108TU/ml。结论成功构建了RECK基因的重组慢病毒载体,为研究RECK基因在胰腺癌中的生物学功能和基因治疗奠定基础。第三部分RECK基因重组慢病毒感染人胰腺癌细胞PANC-1的体外实验研究目的观察RECK基因过表达对人胰腺癌细胞株PANC-1生物学行为的影响。方法用LV-RECK感染人胰腺癌细胞株PANC-1,测定感染效率。采用Real-time PCR、Western Blotting法检测RECK基因的表达, MTT法检测PANC-1细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力,MMP-2、MMP-9的表达和活性检测采用Real-time PCR、Western Blotting及明胶酶谱法。结果LV-RECK成功感染PANC-1细胞,感染效率85%以上。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组PANC-1细胞的RECK mRNA和蛋白的表达明显增加(P<0.05)。同时,实验组细胞的侵袭力明显下降(P<0.05),实验组细胞MMP-2、MMP-9的活性显著下降(P<0.05);而三组细胞的增殖、凋亡无明显差异(P>0.05),三组细胞中MMP-2、MMP-9的表达亦无明显差异(P>0.05)。结论RECK基因重组慢病毒可以高效感染PANC-1细胞,可介导RECK基因在PANC-1中表达。RECK基因过表达不影响PANC-1细胞的增殖和凋亡,也不影响MMP-2、MMP-9基因的表达,但是可以在翻译后水平抑制MMP-2、MMP-9,进而有效抑制PANC-1细胞体外侵袭力。第四部分重组RECK基因治疗胰腺癌的体内实验研究目的观察LV-RECK对人胰腺癌动物模型的治疗作用。方法建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,分别在瘤内注射LV-RECK、LV-EGFP、生理盐水,观察抑瘤效果及肝肺转移情况,免疫组化S-P法检测RECK蛋白表达及MVD值,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,并进行生存分析。结果与阴性对照组和空白对照组比较,实验组皮下移植瘤体积明显缩小(P<0.05),抑瘤率为52.68%;实验组RECK蛋白重获表达,MVD值明显降低(P<0.05),凋亡指数显著升高(P<0.05);实验组裸鼠肝肺转移率显著降低(P<0.05),生存期显著延长(P<0.05)。结论重组慢病毒可以介导RECK基因在人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤组织中表达,RECK基因过表达可以抑制肿瘤血管新生,诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制移植瘤的生长和转移,改善荷瘤鼠的预后,为胰腺癌治疗提供了一个新的途径。