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环孢素A(cyclosporine A，CsA)系一具有划时代意义的免疫抑制剂，其临床应用显著改善了实体器官移植的近期存活率，尽管新型免疫抑制剂不断涌现，CsA仍然是器官移植后免疫抑制和抗排斥反应的首选药物。但CsA也有很强的副作用，是限制其临床应用的主要原因，CsA慢性肝、肾毒性所致的肝肾纤维化已成为器官移植领域亟待解决的问题。罗格列酮(rosiglitazone，RGZ)属噻唑烷二酮类(thiazolidinediones，TZDs)胰岛素增敏剂，通过激活过氧化物酶体增生物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPAR γ)而发挥作用。PPAR γ属Ⅱ型核受体超家族成员，参与脂肪代谢、核酸代谢、细胞周期和细胞分化等代谢过程，亦参与炎症和细胞外基质重塑，从而在抗炎、抑制纤维化等非代谢性调节方面起着重要作用。因此，我们推测PPAR γ可能是防治CsA导致的肝、肾器质性病变的一个新靶点，到目前为止，有关RZG对CsA慢性肝、肾毒性保护作用的研究国内外均未见报道。本实验采用低盐饮食(low salt diet，LSD)饲养的大鼠CsA慢性肝、肾毒性模型，观察RGZ对CsA慢性肝、肾毒性的保护作用，并在体外分别培养肾间质成纤维(normal rat kidney，NRK)细胞和肝实质(Buffalo Rat Liver，BRL)细胞，进一步监测RGZ对CsA细胞毒性的干预作用，初步探讨其内在的可能机制。本实验分为以下两个部分：郑州大学2004届博士研究生论文罗格列酮对环抱素A慢性肝、肾毒性保护作用的实验研究第一部分罗格列酮对环抱素A慢性肾毒性 保护作用的实验研究 一体内实验方法1实验分组:健康雄性SD大鼠，低盐饮食(钠质量分数0.037%)饲养1周后 挑选体重240一26鲍的大鼠随机分为:1)对照组:LSD，12只;2)模型组: LsD+CsA(15毗.Kg一，.a一‘)，25只;3)治疗组:LsD+CsA(15mg.Kg一，.d”) +RGz(smg.K扩.韶)，巧只。于实验第2周每组随机收获6只大鼠，实验 第5周收获全部大鼠。2体重和生化指标检测:收获动物前测体重，用日立7600型全自动生化分析 仪检测血清肌醉(serum ereatinine，sCr)、尿肌配(urine ereatinine，uCr)和 血清白蛋白(Azbumin，A一b)。肌配清除率(ereatinine elearanee，Cer)以 sCr、uCr及24h尿量计算。3肾组织病理改变以HE切片观察间质单个核细胞浸润数，并以Masson染色 观察肾间质纤维化比例。4免疫组织化学染色(玩叨unohistoche而卿，IHc)检测m型胶原(conagenm， Collll)、转化生长因子书1伽此fonr血9 growth丘ICtor一pl，TGF一pl)、Pl叭RY 和a一SMA(a一smooth musele actin)的表达。5反转录聚合酶链反应(reverse transcription一polymerase ehain reaction， Rl’- PCR)检测TGF一pl和PPARY的mRNA表达。6蛋白印迹分析(western blotti雌)检测P队RY、纤维连接蛋白(ntironectin， FN)、血管紧张素111型受体(Angiotensin 11 tyPe 1 ree即tor，ATI)和磷酸 化一细胞外信号调节激酶(p加spho汀lation一extracellular signal regulated kinase，p一E双)的蛋白表达。7放免法检测血浆和肾组织中血管紧张素11(如giotensin 11，Ang 11)活性。郑州大学2004届博士研究生论文罗格列酮对环饱素A慢性肝、‘肾毒性保护作用的实验研究结果1体重:与对照组相比，模型组大鼠体重显著下降(尸<0.05)，给予罗格列酮 后大鼠体重下降减慢，第5周大鼠体重与模型组有显著性差异(P<0.05)。2生化指标(Ccr、Alb):实验第2周，模型组Ccr和血清Alb显著下降(P<0.05)， 而治疗组二者下降程度均低于模型组，但两组间并无显著性差异(尸>0.05); 实验第5周，模型组Ccr和血清Alb下降更显著(P<0.05)，罗格列酮显著 改善治疗组Ccr的降低(尸<0.05)，而治疗组血清Alb与模型组并无显著性 差异(P>.05)。3单个核细胞浸润:相对于对照组，模型组肾小管间质单个核细胞浸润数在第 2周时和第5周时都显著增加(P<0.05)，罗格列酮均可显著减少两个时间点 肾间质浸润的单个核细胞数(尸<0.05)。4间质纤维化:模型组肾间质纤维化程度(Masson染色)与对照组相比显著增 加(P<0.05)，而罗格列酮可显著减少间质纤维化程度(P<0.05)。模型组Colm IHC染色在实验第2、5周均显著增加(尸<0.05)，罗格列酮可显著减轻第5 周时的Col nl染色(P<0.05)。对照组FN蛋白有少量基础表达，模型组及 治疗组FN蛋白表达较对照组增加(尸<0.05)且5周时高于2周时的表达 (P<0.05)，治疗组第2周及第5周FN蛋白表达均显著低于同时限模型组 (P<0 .05)。sa一SMA:给予CsA后，在实验第2周和第5周Q一SMA IHC染色均显著增 加(尸< 0.05)，罗格列酮可显著减少第5周时的a一SMA着色(尸<0.05)。6 Angll活性:给予CsA后第2周及第5周，血浆和组织Angll活性与对照组 相比均显著增强(p<0.05)，而罗格列酮则显著降低同时限的劫911活性 (P<0 .05)。7 ATI受体:对照组ATI受体有一定量基础表达，模型组ATI受体表达较对 照组显著降低(尸<0.05)，且5周时表达低于2周时(尸<0.05);治疗组第2 周及5周ATI受体表达均高于