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目的:1)探讨高产AmpCβ-内酰胺酶的肠杆菌科细菌医院感染现状及耐药谱特性,以利于临床合理选用抗生素;2)比较表型筛选法与三维试验法检测AmpC酶的差异性;3)阴沟肠杆菌ampD基因突变与ampC基因表达关系的研究。 方法:1)对武汉大学人民医院2001年6月～2003年12月期间分离的肠杆菌科细菌,均以VITEK 32型全自动细菌分析系统进行鉴定,对其中头孢西丁耐药株,以酶提取物三维实验检测高产AmpC酶菌株,进而用琼脂稀释法检测高产AmpC酶菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC);2)采用表型筛选法检测高产AmpCβ-内酰胺酶,并将表型筛选法的结果与三维试验的结果进行比较;3)选取三维试验阳性的阴沟肠杆菌4株,将ampD基因的PCR扩增产物作DNA测序,分析ampD基因突变与ampC基因表达的关系。 结果:1)2001年6月～2003年12月,从武汉大学人民医院临床各类标本中收集到对多种三代头孢菌素和氨曲南耐药或中介的肠杆菌科菌株252株,通过三维试验证实高产AmpC酶菌株共36株,总分离率为14.3%。包括阴沟肠杆菌22株,弗氏枸橼酸杆菌10株,沙雷菌3株,肺炎克雷伯菌1株。其来源按标本类型分以痰液最多,占75.0%(27/36)。按病区来分以重症监护病房(ICU)最高,占44.4%(16/36)。11种常用抗生素对高产AmpC酶肠杆菌科细菌的MIC值分布情况和耐药率结果可见:对头孢西丁、哌拉西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药率最高,达100.0%,对头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶的耐药率也很高,分别为97.2%、88.9%、86.1%;对碳青霉烯类抗生素亚胺培南最为敏感,耐药率为0.0%,对氨基糖苷类抗生素阿米卡星、四代头孢菌素头孢吡肟敏感性也较好,耐药率分别仅为19.4%和8.3%。2)表型筛选法的敏感性和特异性分别为86.8%和95.5%,表型筛选法与三维试验的总符合率为92.4%(P<0.05),McNemar P值为0.4795,Kappa P值<0.01,说明表型筛选法的检测结果可靠;3)4株阴沟肠杆菌经PCR扩增,均获得698bp的ampD片段。与对照序列Kopp报道的ampD14基因进行序列比较,显示3株高产AmpC酶菌株的ampD基因存在氨基酸点突变,其突变位点变化为Thr-55→Asn,Ile-56→Leu,Ala-71→Arg,Leu-72→Val,Glu-106→Asp,Asp-148→Gly。 结论:1)高产AmpC酶的肠杆菌科细菌在武汉大学人民医院分离率较高,其主要来源为ICU和老年病区,主要感染部位为呼吸道和伤口;2)高产AmpC酶的肠