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【目的】本课题从体外和体内两方面模拟临床肝癌手术过程中由缺血再灌注所致的组织缺血、缺氧的状态,联合药物奥曲肽(Octreotide,OCT)进一步处理,观察肝缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,I/RI)对肝癌复发转移的影响,探讨上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)机制在此过程中可能存在的作用,以期为临床预防和治疗肝癌复发转移提供新思路,也为研究肝I/RI与肝癌复发转移之间的关系提供更多实验基础。【方法】1.缺氧、低血清培养高侵袭转移人肝癌细胞株MHCC97-H,24h、48h后观察细胞形态的变化,同时运用MTT、Transwell、划痕实验方法检测其增殖、侵袭及迁移能力的变化。运用MTT及TUNEL等方法检测不同浓度OCT(1μg/m L、5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L)对MHCC97-H细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡能力的影响。2.先利用MHCC97-H细胞注射裸鼠皮下成瘤,再建立裸鼠原位肝癌模型,随后施以肝I/RI(选择性阻断肝门部血流0min、15min、30min)建立裸鼠肝缺血再灌注损伤模型,同时给予低剂量OCT(50μg/kg·d)随机干预部分I/RI 30min组裸鼠模型。30天后,比较无缺血损伤组(I/RI 0min)、肝缺血再灌注损伤组(I/RI15min、30min)和OCT处理组(I/RI 30min+OCT)之间肝癌复发转移率的差异。3.Western Blot法检测经缺氧、低血清培养及不同浓度OCT作用后的MHCC97-H细胞,以及裸鼠原位肝癌和复发肝癌间EMT相关蛋白表达差异,包括上皮-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),转录因子Snai 1和Twist蛋白。免疫组化法检测裸鼠原位肝癌和复发肝癌间E-cadherin和Vimentin两种蛋白表达的差异。【结果】1.细胞学实验:MHCC97-H细胞在缺氧、低血清条件下培养24h,48h后,失去正常细胞的多角形形态,变成梭形,且细胞的侵袭、迁移能力增强;MTT、Transwell、划痕实验显示OCT对MHCC97-H细胞的增殖、侵袭、迁移能力均具有抑制作用,且与浓度正相关(p(27)0.05);TUNEL实验显示不同浓度的OCT对MHCC97-H细胞均无明显的促凋亡作用(p>0.05)。2.动物实验:不同时间肝I/RI(15min、30min)处理均可导致裸鼠肝癌复发率上升,且肝I/RI时间越长,复发率升高越明显;连续低剂量的OCT皮下注射则能降低肝癌复发率。各实验组裸鼠均无肝癌远处转移的发生。3.Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snai l及Twist表达,结果显示:缺氧、低血清培养MHCC97-H细胞48h后,E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、Snai l、Twist蛋白表达升高,而加入OCT后,E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin、Snai l、Twist蛋白表达降低(p(27)0.05)。与裸鼠原位肝癌相比,肝I/RI组(0min、15min、30min)和OCT组的复发肿瘤上述蛋白表达变化趋势与体外实验一致(p(27)0.05)。免疫组化检测E-cadherin、Vimentin蛋白表达,结果显示:裸鼠复发肝癌组织较原位肝癌E-cadherin蛋白表达降低,而Vimentin蛋白则表达增加,与Western Blot检测结果相符。【结论】1.肝I/RI可促进裸鼠肝癌复发,且I/RI时间越长复发率越高。2.肝I/RI可能通过促进肝癌细胞发生EMT,即E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、Snai l和Twist蛋白表达升高,致使细胞侵袭、转移能力增强。3.OCT可能通过抑制肝癌细胞发生EMT,从而逆转由肝I/RI所致的肝癌复发率升高。