重组人白介素2（recombinant Interleukin-2，rIL2）注射水针剂和冻干剂两种剂型的治疗效果和毒副作用与给药剂量呈正相关。近期欧盟批准了高剂量注射用rIL2制剂用于晚期肿瘤的辅助治疗，临床应用在具有明确治疗效果外，毒副作用非常明显，提示开发高效、稳定的rIL2新制剂十分必要。前期研究室成功设计了重组人白细胞介素2-人血清白蛋白融合蛋白（rIL2-HSA）新药物分子，证明其可有效的保持IL2的生物活性，并显著提高了体内外的稳定性，实现了在毕赤酵母中的表达和制备工艺。本文在发酵生物制备获得rIL2-HSA融合蛋白的基础上，参照国家药典的要求，开展了注射用rIL2-HSA融合蛋白的水针剂和冻干粉针剂型研究，为其申报临床试验批件创造了条件。生物制备获得的rIL2-HSA融合蛋白符合治疗用生物制品的质量要求。CTLL-2细胞/MTT比色法分析融合蛋白的生物活性为1.8106IU/mg；SDS-PAGE分析其分子量约为81kDa；HPLC分析纯度为98%；IEF分析其pI为5.2；DSC分析其初始变性温度为63.93℃；13g/L时融合蛋白液体和冻干后样品外观均呈微黄色，1g/L液体外观清亮无色，冻干品为白色饼层固体。采用HPLC和非还原性SDS-PAGE分析融合蛋白，在3种缓冲体系pH4-8范围内，pH5.0的10mM乙酸盐缓冲体系可利于融合蛋白的稳定保存。在此条件下37℃和4℃放置15、30、60天间隔取样分析发现融合蛋白未见明显的聚合体，60天样品有约2%的降解产物；4℃存放更利于融合蛋白的稳定保存；pH大于6时降解产物明显增加，并出现严重的聚合现象；随着pH的增加，融合蛋白聚合体也明显增加。参照国家药典对治疗用生物制品注射液常用辅料选择的要求，考察了6种渗透压调节剂（氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、丙三醇和甘氨酸）和1种非离子表面活性剂吐温-80对融合蛋白的影响。分析发现上述6种渗透压调节剂对融合蛋白未见改变；0.005%吐温-80可导致融合蛋白降解产物达26%。以与血浆等渗比例配比渗透压调节剂，考察了8种组方的液态制剂和7种组方的冻干制剂。分别在37℃保存30、60、90天后取样检测，发现其中7种液态组方均有较好的融合蛋白稳定作用；2种含甘氨酸和甘露醇的冻干组方适于冻干制剂的制备，但37℃保存60天开始出现降解现象。优选6种液态组方和2种冻干组方于4℃恒温保存180天，进行长期稳定性实验。采用光稳定性实验、渗透压摩尔浓度测定、可见异物检查、生物学活性鉴定和热稳定性分析显示其中2种液态组方和1种冻干组方符合国家药典的质量考核要求。优化选择液态剂型为：乙酸-乙酸钠缓冲盐10mM、融合蛋白1g/L、氯化钠0.8%，pH=5；冻干剂型为：乙酸-乙酸钠缓冲盐10mM、融合蛋白1g/L、甘氨酸2.3%，pH=5。两种优化剂型的SE-HPLC和RP-HPLC蛋白质纯度都在95%以上，SDS-PAGE分析未见明显降解，生物活性均可保持在1.2106IU/mg左右；其中冻干粉稳定性满意，且其比活性普遍优于液态剂型。