酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作为传统乙醇代谢菌和真核模式生物备受科学家青睐。利用分子育种手段对酿酒酵母进行改造是乙醇产生菌育种的发展方向。基因缺失突变株是研究酿酒酵母乙醇代谢调控和信号传导分子机制的理想材料，应用基因敲除技术构建酿酒酵母基因缺失突变株进而选育乙醇高产菌株具有重要的理论应用价值。本文利用基因敲除技术成功构建SFA1／ADH3基因缺失的酿酒酵母突变株两株，取得以下研究成果：1、应用PCR为介导的基因敲除技术，成功构建了SFA1基因敲除组件，转化酿酒酵母YS₁一次性敲除SFA1两个等位基因，获得SFA1双倍体基因缺失突变株YS₁-SFA1。该突变株较出发菌株乙醇合成量提高8.0％。2、利用G418（Kan^r）抗性筛选标记依次敲除YS₃酿酒酵母ADH3两个等位基因，成功获得高遗传稳定性ADH3基因缺失突变株YS₃-ADH3。该突变株在厌氧条件下生长行为与出发菌株相比呈现明显的差异，是探索ADH3基因代谢调控及信号通路传导机制的良好材料。3、与模式S．cerevisiae相比，酿酒酵母YS₃与YS₄的ADH3及SFA1基因上下游调控序列存在明显差异，分别为YS₃：ADH3上游（97.9％），ADH3下游（98.8％），SFA1上游（98.5％），SFA1下游（99.1％）。YS₄：ADH3上游（89.1％），ADH3下游（90.0％），SFA1上游（91.0％），SFA1下游（86.9％）。4、18S rDNA序列和聚类分析表明酿酒酵母YS₄（GenBank Accession No．：EF153844）和YS₅（GenBank Accession No．：EF153845）分别与已报道的GK3和SCZ75578菌株具有很近的亲缘关系。