论文部分内容阅读
本课题基于抗氧化衰老这一社会热点,对蚯蚓提取物(extract from earthwo-rm,EE)的抗氧化作用及机理展开研究,为开发和利用蚯蚓抗氧化提取物提供科学理论依据。试验方法:(1)采用SOD、CAT、GSH-PX试剂盒提供的方法对5个不同批次的EE的主要抗氧化成分SOD、CAT、GSH-PX进行测定。(2)通过构建邻苯三酚自氧化体系、Fenton反应体系及脂蛋白PUFA过氧化体系,测定EE体外对O2-·和·OH的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用。(3)采用不同浓度EE灌喂成年小白鼠,30天后测定其血液和肝脏抗氧化酶活性变化及MDA含量变化,检测EE对小白鼠体内的抗氧化作用。(4)通过复制氧化损伤模型,采用EE和VC对损伤部分进行治疗,测试该部位皮肤的抗氧化活性物质的变化以及用普通显微镜和扫描电镜观察试验皮肤的形态结构的变化,检测EE对皮肤氧化损伤的保护作用。(5)采用半定量RT-PCR法测定损伤皮肤组织中β-Actin、Tubulin--α、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原的基因表达量,检测蚯蚓提取物对氧化损伤皮肤中相关结构蛋白基因表达量的影响。结果表明:(1)EE中含有丰富的抗氧化酶,其中SOD含量为:898.41±42.39U/mg,CAT含量为:18.52±2.86 U/mg,GSH-PX含量为:60.03±10.75活力单位。(2) EE对体外自由基有较强的清除作用、对脂质体氧化有较强的抑制作用。(3) EE的原液和10倍稀释液能显著提高小白鼠血液及肝脏SOD,CAT,GSH-PX活性,有效降低小白鼠体内的脂质过氧化水平;20倍稀释试验组效果不明显。(4) EE对氧化损伤皮肤有较强的保护作用,各用药组的皮肤中抗氧化酶活性显著高于损伤对照组,MDA的含量也显著低于损伤对照组;病理学的切片显示,EE对于氧化损伤的皮肤具有保护作用。(5) EE能够抑制Fentons反应对细胞DNA分子的损伤,使细胞构型相关基因Tubulin-α、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原的转录活性得到一定的维持,对细胞形态与功能的维持与修复起到了基础性的作用。