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[目的]探索热疗联合Akt抑制剂MK-2206诱导舌鳞癌肿瘤细胞凋亡的作用及相关机制,以期为舌鳞癌的治疗提供新思路。[方法](1)舌鳞癌裸鼠动物模型建立:取4-6周龄BALB/c雄性裸鼠,将舌鳞癌Tca8113细胞种植于裸鼠左后肢皮下,构建裸鼠舌鳞癌移植瘤动物模型。(2)实验分组:待肿瘤体积达250-300mm3时将裸鼠随机均分为四个组,每组7只。对照组(0.2ml 0.9%NaCl瘤腔内注射)、热疗组(0.2ml 0.9%NaCl瘤腔内注射后1h,43℃40min局部水浴热处理)、Akt抑制剂组(0.2ml12nMAkt抑制剂MK-2206瘤腔内注射)、Akt抑制剂+热疗组(0.2ml 12nM Akt抑制剂MK-2206瘤腔内注射后1h,43℃40min局部水浴热处理)。分组后当天即给予相应处理,之后每间隔两天处理1次,共处理3次,处理前均给予腹腔麻醉。最后一次处理后间隔两天,处死裸鼠,切取瘤体组织备用。(3)记录每次裸鼠处理前及处死后的肿瘤体积(V=长径×短径2/2),测量肿瘤离体后的体积及重量,计算抑瘤率。抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重—处理组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。(4)HE染色观察肿瘤组织细胞形态。(5)原位末端标记(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡。(6)免疫组织化学检测肿瘤组织细胞Akt2、p-Akt2、eIF4E、p-eIF4E、Bad、Ki67的表达水平。(7)肿瘤组织均浆,提取总蛋白,免疫印迹检测Akt2、p-Akt2、eIF4E、p-eIF4E、Bad、Bcl-2的表达水平。(8)SPSS 17.0统计软件对数据进行统计学分析。[结果](1)热疗和Akt抑制剂MK-2206均能抑制裸鼠舌鳞癌移植瘤的生长,二者单独应用的抑制效果差异没有统计学意义(p>0.05)。热疗联合Akt抑制剂处理对肿瘤的生长抑制作用较二者单独应用明显增强,差异具有统计学意义(p<0.05)。各组离体瘤重分别为对照组(1.553±0.162)g,热疗组(0.879±0.228)g,Akt 抑制剂组(0.951±0.290)g,Akt 抑制剂+热疗组(0.487±0.189)g。单纯热疗组抑瘤率为43.40%,单独MK-2206处理组抑瘤率为38.76%,而二者联合应用的抑瘤率达68.64%。(2)HE染色可见各组大量肿瘤细胞并有癌巢形成,细胞间质少,肿瘤细胞大小不一,胞核大,胞浆少,可见多个核仁,细胞核偏向一侧。加热组及Akt抑制剂组可见细胞皱缩,胞核深染,呈现凋亡的形态学改变,Akt抑制剂联合热疗组细胞呈现的凋亡形态学改变更加明显。(3)TUNEL检测各组肿瘤细胞凋亡情况,结果发现,对照组200倍视野下细胞凋亡数为(4.042±1.756)个;热疗组细胞凋亡数为(10.083±2.603)个,Akt抑制剂组细胞凋亡数为(11.042±2.236)个,两者与对照组相比细胞凋亡数均明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05);Akt抑制剂联合热疗组细胞凋亡数显著增多,达(33.625±3.118)个,与单独处理组差异均具有统计学意义(p<0.05)。(4)免疫印迹和/或免疫组织化学检测发现:热疗和Akt抑制剂MK-2206对Akt2和eIF4E的表达量没有明显调节作用,但均能下调Akt2和eIF4E的磷酸化水平及Bcl-2和Ki67的蛋白水平,上调Bad的蛋白表达水平,与对照组相比,差异均有统计学意义(p<0.05),但热疗组和Akt抑制剂组之间差异没有统计学意义(P>0.05)。Akt抑制剂联合热疗处理后对Akt2的蛋白水平无明显调节作用,但eIF4E的表达出现下调;与单独热疗或Akt抑制剂处理组相比,联合处理组p-Akt2、p-eIF4E、Bcl-2、Ki67表达水平进一步下降,对Bad的上调作用进一步增强,差异有统计学意义(p<0.05)。[结论]热疗和Akt抑制剂MK-2206均能抑制裸鼠舌鳞癌移植瘤的生长,诱导细胞凋亡发生,二者联合应用能够加强舌鳞癌移植瘤的生长抑制作用及细胞凋亡诱导作用,其机制可能与Akt及eIF4E的调控有关。